脂聯素在小鼠腦缺血模型中的促血管新生作用及機制探討.pdf

1、背景和目的:缺血性腦卒中是危害人類健康的常見疾病。既往研究發(fā)現缺血區(qū)域的血管新生對恢復神經功能至關重要。脂聯素是一種主要由脂肪細胞分泌的激素,有抗炎和抗動脈粥樣硬化的作用,對缺血性腦損傷具有保護作用,但脂聯素在抗缺血損傷中的機制目前仍不明確。
　　本研究運用小鼠腦缺血模型,觀察脂聯素、AdipoR1、AdipoR2在缺血腦組織中的表達;通過腺相關病毒載體基因治療的方法,觀察腦缺血模型中脂聯素對血管新生的影響,闡述脂聯素在腦缺血中的

2、作用機制。
　　方法:(1)60只CD-1小鼠行tMCAO術,運用實時定量PCR,Westernblot和免疫組化的方法觀察小鼠腦缺血/再灌注后1小時、4小時、1天、3天、7天時腦內脂聯素、脂聯素受體的表達。(2)120只小鼠分別接受AAV-GFP、AAV-APN或生理鹽水腦定位注射治療,7天后行tMCAO術,觀察脂聯素對腦缺血/再灌注小鼠腦萎縮程度、血管新生、P-AMPK及VEGF表達的影響。(3)30只APN組小鼠在tMCAO

3、術前,術后腹腔注射AMPK抑制劑Compound C,觀察腦缺血/再灌注后腦萎縮程度、血管新生、P-AMPK及VEGF的表達情況。
　　結果:(1)缺血/再灌注后,在小鼠缺血側腦組織中脂聯素蛋白表達量增加,缺血中心區(qū)的脂聯素蛋白表達量高于缺血周邊區(qū),且脂聯素的表達僅位于血管內皮細胞。缺血前后腦組織中脂聯素mRNA表達水平無明顯變化。(2)缺血/再灌注后,在缺血側腦組織中AdipoR1的蛋白和mRNA表達量增高,缺血中心區(qū)和缺血周邊

4、區(qū)AdipoR1蛋白的表達量相似;腦血管內皮細胞、星形膠質細胞和神經元細胞中均有AdipoR1的表達。缺血前、后的腦組織中均未見AdipoR2的表達。(3)APN組小鼠缺血側大腦半球萎縮程度為7.9±0.6％,明顯小于生理鹽水組(20.3±1.1％)和GFP組(19.8±0.3％)(P＜0.01)。APN組缺血周邊區(qū)血管密度為199±5/mm2,高于生理鹽水組(148±4/mm2)和GFP組(151±4/mm2)(P＜0.05)。(4)

5、缺血/再灌注后,APN組小鼠P-AMPK、VEGF的表達量在缺血側腦組織中均增高(p＜0.01),而Total AMPK的蛋白表達量在缺血前后無明顯差異。(5)APN組小鼠經APMK抑制劑Compound C處理后,缺血側大腦半球萎縮程度(14.7±2.1％)大于對照組(7.7±1.8％)(P＜0.05);缺血周邊區(qū)血管計數(109±4/mm2)明顯少于對照組(200±6/mm2)(p＜0.01);缺血側腦組織中P-AMPK蛋白表達量、