喜樹(shù)規(guī)范化種植（GAP）及10-羥基喜樹(shù)堿制備方法研究.pdf

1、喜樹(shù)(Camptotheca acuminata Decne)是藍(lán)果樹(shù)科(Nyssaceae)喜樹(shù)屬(Camptotheca)喬木，落葉闊葉樹(shù)，主產(chǎn)亞熱帶地區(qū)。喜樹(shù)堿是從喜樹(shù)中提取的有效的抗腫瘤活性成分，喜樹(shù)堿及其衍生物能作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶，因此阻止細(xì)胞分裂。喜樹(shù)堿的衍生物，如伊立替康，拓?fù)涮婵?，在治療結(jié)腸癌，小細(xì)胞肺癌和白血病、乳腺癌、肺癌、頑固性結(jié)腸癌、頭頸癌和惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤等療效顯著。隨著市場(chǎng)對(duì)于喜樹(shù)堿原料藥的需求越來(lái)越大，喜樹(shù)堿供

2、不應(yīng)求。廣西東蘭縣地處桂北石灰?guī)r地區(qū)，是我國(guó)主要的喜樹(shù)種植區(qū)之一。為了有科學(xué)的方法指導(dǎo)喜樹(shù)的種植，我們?cè)趶V西東蘭建立了喜樹(shù)規(guī)范化種植基地，對(duì)于喜樹(shù)的種植技術(shù)，病害防治技術(shù)，以及采收加工等規(guī)范化種植過(guò)程中的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了研究。同時(shí)嘗試用兩條不同路線合成10-羥基喜樹(shù)堿，其中一條路線得到了較高收率的10-羥基喜樹(shù)堿，用高速逆流色譜分離純化得到了高純度的10-羥基喜樹(shù)堿，具有高回收率，主要副產(chǎn)物喜樹(shù)堿可以回收再利用。 1.喜樹(shù)種植基地

3、的選擇及環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)從喜樹(shù)栽培社會(huì)歷史背景、種植地地理氣候條件、土壤以及環(huán)境質(zhì)量等多方面評(píng)價(jià)與選定種植地，避免隨意引種栽培。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣西東蘭是喜樹(shù)傳統(tǒng)種植區(qū)之一，該地區(qū)的氣候條件和土壤都適宜喜樹(shù)的生長(zhǎng)。對(duì)種植地的大氣、土壤和灌溉水質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)，其大氣、土壤和灌溉水質(zhì)量均符合《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。因此，喜樹(shù)規(guī)范化種植地設(shè)于遠(yuǎn)離居民生活區(qū)、工業(yè)區(qū)和交通要道的廣西東蘭縣蘭木鄉(xiāng)納核村。 2.喜樹(shù)種植技術(shù)與病蟲(chóng)害防治對(duì)

4、喜樹(shù)育苗技術(shù)、種植技術(shù)、病害防治等規(guī)范化種植過(guò)程中的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了總結(jié)，以及對(duì)石灰?guī)r山地種植的喜樹(shù)的生長(zhǎng)性能進(jìn)行了測(cè)定。首先，對(duì)喜樹(shù)育苗技術(shù)進(jìn)行了探索，包括苗床消毒，種子處理，播種，苗期管理等環(huán)節(jié)進(jìn)行了詳細(xì)描述。種植技術(shù)中的施肥，移植和田間管理環(huán)節(jié)做了總結(jié)。褐斑病是石灰?guī)r山區(qū)喜樹(shù)最嚴(yán)重的病害，針對(duì)其病因及發(fā)病規(guī)律作出了喜樹(shù)褐斑病的綜合防治技術(shù)，農(nóng)業(yè)防治減少病原，合理施肥增強(qiáng)樹(shù)勢(shì)，在高溫多雨季節(jié)用波爾多液進(jìn)行化學(xué)防治，發(fā)病初期用50﹪代森

5、錳鋅或多抗霉素(多氧霉素)，世高水分散粒劑，葉斑清乳進(jìn)行防治，連續(xù)防治2～3次。 3.喜樹(shù)堿分析方法研究針對(duì)喜樹(shù)中的有效化學(xué)成分喜樹(shù)堿，建立了高效液相色譜法測(cè)定喜樹(shù)中不同部位喜樹(shù)堿含量的方法。本研究可用于不同成熟度的喜樹(shù)果實(shí)，不同產(chǎn)地采集的喜樹(shù)果實(shí)，不同生長(zhǎng)期的喜樹(shù)葉，不同土壤條件下種植的喜樹(shù)的喜樹(shù)葉，喜樹(shù)不同組織部位，不同干燥方式的喜樹(shù)果實(shí)，儲(chǔ)存時(shí)間不同的喜樹(shù)樣品中的喜樹(shù)堿的含量分析。用超聲提取法制備供試品，并且優(yōu)化了供試品的

6、制備條件。本方法對(duì)于喜樹(shù)的基礎(chǔ)研究，以及喜樹(shù)的開(kāi)發(fā)利用，均具有十分重要的作用。 4.各因素影響喜樹(shù)堿含量的研究為了確定作為喜樹(shù)堿生產(chǎn)原料的喜樹(shù)組織部位，最佳的采收期，以及為喜樹(shù)原料的最佳干燥儲(chǔ)存方式提供正確的指導(dǎo)。分析討論了各因素對(duì)喜樹(shù)堿含量變化的影響：喜樹(shù)果實(shí)中的喜樹(shù)堿隨著果實(shí)成熟度的增加而逐漸增加；廣西東蘭的喜樹(shù)果實(shí)和湖南通道的喜樹(shù)果實(shí)喜樹(shù)堿得含量差別不大，但是同屬同一產(chǎn)地的華南植物園和華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的喜樹(shù)果實(shí)中喜樹(shù)堿含量相差

7、1倍；喜樹(shù)葉片中的喜樹(shù)堿含量三、四月份較高，然后變化逐漸趨于平緩；在廣西東蘭處于不同立地條件生長(zhǎng)的喜樹(shù)葉中喜樹(shù)堿的含量無(wú)明顯差異；喜樹(shù)嫩葉比老葉中喜樹(shù)堿含量高，嫩枝條比老枝條中的喜樹(shù)堿含量高，花也是一個(gè)喜樹(shù)堿含量較高的部位，僅次于果實(shí)中的喜樹(shù)堿含量；常溫真空干燥的喜樹(shù)果實(shí)中喜樹(shù)堿的含量最高，烘干和曬干的喜樹(shù)果實(shí)中喜樹(shù)堿含量差別不大，陰干的稍低；喜樹(shù)果實(shí)以及喜樹(shù)葉在干燥條件下儲(chǔ)存，其中的喜樹(shù)堿含量無(wú)變化。本研究為科學(xué)的制定喜樹(shù)規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)操

8、作規(guī)程(SOP)以及喜樹(shù)資源的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。 5.10-羥基喜樹(shù)堿的合成10-羥基喜樹(shù)堿是在國(guó)內(nèi)上市的抗腫瘤藥物，也是多種已在美國(guó)上市的喜樹(shù)堿類抗腫瘤藥物的原料藥，本文嘗試了用兩條不同路線合成10-羥基喜樹(shù)堿。其中一條路線通過(guò)氧化喜樹(shù)堿得到喜樹(shù)堿氮氧化物，再通過(guò)光重排反應(yīng)得到10-羥基喜樹(shù)堿此路線，產(chǎn)率高，得到的10-羥基喜樹(shù)堿副產(chǎn)物少，且主要副產(chǎn)物是喜樹(shù)堿，可以回收利用。另一條路線第一步反應(yīng)有較好的結(jié)果，但是