積雪草酸對心肌缺血-再灌注損傷的保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的:通過體內(nèi)和體外實驗探討積雪草酸（Asiatic acid，AA）對心肌缺血再灌注的保護作用及其機制
　　方法:本文通過體外培養(yǎng)原代乳大鼠心肌細胞，結合厭氧袋與氧糖剝奪相結合(OGD)的方法模擬心肌細胞缺血-再灌住(I-R)損傷來觀察AA對心肌細胞氧化損傷及心肌細胞凋亡的作用;體內(nèi)通過結扎小鼠左前降支來建立I-R模型，觀察AA對缺血再灌注損傷的心肌組織的保護作用，并探討相關作用機制。具體方法如下:
　　1.細胞模型的建立

2、:
　　原代培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，采用氧糖剝奪及厭氧袋相結合法，利用DMEM(無糖)替代DMEM(高糖)，厭氧袋模擬缺氧環(huán)境，缺氧6h，再灌住12h制備心肌細胞I-R模型。觀察AA(20 umol/l)預處理對心肌細胞缺血再灌注損傷的作用。測定指標如下:熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS熒光強度和心肌細胞線粒體膜電位，流式細胞儀檢測細胞凋亡。Western Blot法檢測心肌細胞MAPK信號激酶(p38，ERK1/2以及JNK)和線粒體凋亡相

3、關蛋白(Caspase-9，Caspase-3，Cyto-chrome c， Bcl-2以及Bax)的表達。
　　2.動物模型的建立
　　C57B6雄性小鼠，術前AA或相應安慰劑預處理7天，加藥組每天灌胃AA100mg/kg，后常規(guī)建立小鼠MI/R(30 min/6 h)模型。觀察AA預處理對心肌缺血再灌注損傷的作用。測定指標如下:應用小動物彩色多普勒超聲儀檢測AA小鼠心臟血流動力學變化，解剖顯微鏡下拍照并用Image J面

4、積測算軟件計算心肌梗死面積，熒光顯微鏡觀察組織ROS熒光強度，TUNEL原位標記法檢測心肌組織中細胞凋亡，Western Blot法檢測心肌細胞MAPK信號激酶(p38，ERK1/2以及JNK)和線粒體凋亡相關蛋白(Caspase-9，Caspase-3，Cyto-chromec，Bcl-2以及Bax)的表達。
　　結果:在體實驗顯示缺血再灌注后小鼠心臟功能降低、心肌梗死面積增大，AA預處理能夠增加小鼠的LVEF和％FS水平，提高

5、心臟功能，并能夠降低心肌梗死面積，體外實驗和體內(nèi)實驗的I-R模型均能夠誘導心肌細胞凋亡，并且心肌細胞內(nèi)ROS水平顯著升高，線粒體膜電位顯著降低，心肌細胞內(nèi)Cleavedcaspase-9，-3以及Cyto-chrome c蛋白表達顯著增加，Bax/Bcl-2比例升高，p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平增加。AA預處理可以顯著降低心肌細胞凋亡率，降低心肌細胞內(nèi)ROS水平，升高線粒體膜電位，降低Cleaved caspase-9，-3和