Calpain家族對肝癌細胞耐受阿霉素促凋亡作用及遷移能力的影響.pdf

1、目的：觀察阿霉素（ADM）作用下肝癌細胞（HepG2）鈣激活中性蛋白酶（Calpain）家族的促凋亡作用和表達水平的影響，以及Calpain家族對肝癌細胞遷移能力的影響，進一步認識肝癌發(fā)生的分子機制，為臨床肝癌的防治提供依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分：Calpain家族對肝癌細胞耐受ADM促凋亡作用的影響
　　采用人HepG2肝癌細胞系為模型細胞，常規(guī)細胞培養(yǎng)；通過MTT法觀察ADM對HepG2肝癌細胞的抑制效應；通

2、過蛋白免疫印跡法（Western blot）分析ADM對 HepG2肝癌細胞 Calpain-1及 Calpain-2表達水平的影響；采用 Calpain-2抑制劑 Calpastatin peptide預處理模型細胞，觀察 Calpastatin peptide對ADM誘導HepG2肝癌細胞凋亡及Calpain-2、Src表達水平的影響。
　　第二部分：Calpain家族對肝癌細胞遷移能力的影響
　　采用人肝細胞來源的5株

3、細胞系HepG2、MHCC97-H、Changliver、Hep3B2.1.7、LM3為模型細胞，常規(guī)細胞培養(yǎng)；通過 Western blot法分析不同轉移能力肝細胞系中 Calpain-1、Calpain-2、Calpastatin及 Src的表達水平；采用Calpastatin peptide預處理模型細胞MHCC97-H，通過劃痕實驗觀察高轉移肝癌細胞MHCC97-H的遷移能力；并采用Western blot法分析Calpasta

4、tin peptide對MHCC97-H細胞的Calpain-1、Calpain-2、Src表達及剪切活性。
　　結果：
　　第一部分
　?。?） ADM對HepG2細胞有明顯的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度為2.5μmol/L；
　?。?） ADM對HepG2細胞Calpain-1及Calpain-2表達的影響均表現(xiàn)為先降低（0.5h，1h，4h）后升高（12h，24h，48h，72h），有統(tǒng)計學意義；其相應的低分子

5、量片段（LMW）也呈現(xiàn)出先降低（0.5h，1h，4h）后升高（12h，24h，48h，72h）的變化，均有統(tǒng)計學意義；
　?。?） Calpain-2抑制劑Calpastatin peptide促進ADM對HepG2細胞凋亡誘導作用，與只用Calpastatin peptide的HepG2細胞組比較P<0.05或P<0.01；且Calpastatin peptide抑制ADM處理組及非處理組對Calpain-2及Src表達的上調。

6、
　　第二部分
　?。?）不同轉移能力的肝細胞系中，Calpain-1的表達及相應 LMW產生變化不大；Calpain-2及 Calpastatin的表達在兩株高轉移肝癌細胞系（MHCC97-H、LM3）中明顯上調，其剪切成為LMW也明顯增多；Src在兩株高轉移肝癌細胞系（MHCC97-H、LM3）中的表達明顯增高，尤其在MHCC97-H細胞中；
　?。?）Calpain-2抑制劑 Calpastatin peptid

7、e明顯抑制高轉移肝癌細胞MHCC97-H的遷移；
　?。?）Calpastatin peptide使高轉移肝癌細胞MHCC97-H Calpain-2及Src的表達下調，Calpain-1的表達沒有明顯變化。
　　結論：
　?。?）ADM長時間(12-72h)作用下，促進HepG2細胞的凋亡，并上調Calpain-1和Calpain-2的表達，相應的低分子量片段也增加。
　?。?）Calpain-2的表達上調和低