深圳地區(qū)HBV耐藥突變的高通量檢測(cè)及分子流行病學(xué)特征.pdf

1、目的：⑴分析不同濃度HBV-DNA對(duì)MALDI-TOF-MS檢測(cè)靈敏度的影響，建立慢性乙型肝炎患者HBV耐藥基因突變的高通量檢測(cè)方法。⑵統(tǒng)計(jì)分析深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者耐藥基因位點(diǎn)突變情況，闡明深圳地區(qū)慢性乙型肝炎患者分子流行病學(xué)特征。⑶比較長(zhǎng)期使用核苷（類）似物治療的患者基因耐藥與臨床耐藥發(fā)生的相符情況，為慢性乙型肝炎患者臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：①根據(jù)慢性乙型肝炎防治指南，篩選2009年至2012年期間在深圳市

2、第三人民醫(yī)院進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)的2465例患者;根據(jù)MALDI-TOF-MS檢測(cè)結(jié)果、用藥情況及肝功能情況確定研究人群3例隨訪患者。②應(yīng)用DNA提取法、倍比稀釋法、實(shí)時(shí)熒光定量法、引物設(shè)計(jì)、質(zhì)譜檢測(cè)和醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)慢性乙型肝炎患者進(jìn)行HBV耐藥基因突變的高通量檢測(cè)及比較慢性乙型肝炎患者耐藥基因位點(diǎn)突變與臨床耐藥的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：⑴通過MALDI-TOF-MS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HBV DNA在103copies/ml水平也可檢測(cè)出突變

3、株，說明MALDI-TOF-MS技術(shù)具有較高的靈敏度。通過對(duì)血清進(jìn)行系列梯度稀釋，發(fā)現(xiàn)HBV DNA在107～104copies/ml之間其野生株和突變株的峰面積比例恒定，說明MALDI-TOF-MS有較高的穩(wěn)定性。⑵在2465例慢性乙型肝炎患者中，共檢測(cè)到763例發(fā)生堿基突變，其中拉米夫定耐藥突變相關(guān)位點(diǎn)頻率最高，約42.96％，其突變位點(diǎn)主要為rtL180M(14.72％)，rtL204I(18.50％)，rtL204V(9.74％

4、);阿德福韋酯耐藥突變相關(guān)位點(diǎn)突變頻率約為8.19％，突變相關(guān)位點(diǎn)主要為rtN236T(4.15％);恩替卡韋耐藥突變相關(guān)位點(diǎn)突變頻率約為0.49％，在所有檢測(cè)標(biāo)本中，未發(fā)現(xiàn)rtS202I位點(diǎn)突變。⑶在核苷（酸）類似物治療過程中，動(dòng)態(tài)隨訪的3例CHB患者，發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)出核苷（酸）類似物相關(guān)突變位點(diǎn)的同時(shí)均出現(xiàn)HBV DNA的反彈及ALT升高，提示MALDI-TOF-MS突變位點(diǎn)的檢測(cè)和臨床耐藥高度一致，能及時(shí)準(zhǔn)確的反應(yīng)耐藥情況。