9p21上位點多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關聯(lián)研究及其與相關因素的交互作用探討.pdf

1、下肢血管病變(Peripheral arterial disease，PAD)是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用的復雜慢性病變，能明顯增加心血管事件、心血管死亡和全因死亡的風險。與非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者PAD患病風險明顯增加，而且發(fā)病年齡提前，病變進展更加迅速。由于大多數(shù)糖尿病PAD患者缺乏明顯的臨床癥狀，使得糖尿病人群普遍存在PAD診斷不足的現(xiàn)象。
　　 在糖尿病患者中，許多非遺傳因素（如年齡、吸煙、血脂異常、高血壓、高

2、血糖和糖尿病病程）在PAD發(fā)生中扮演著重要角色。流行病學調查顯示，不同種族的糖尿病人群PAD患病率明顯不同，提示遺傳因素在糖尿病人群PAD的發(fā)生中可能占有重要角色。
　　 目前多數(shù)全基因組研究表明9號染色體短臂21號區(qū)域(9p21)基因變異與動脈粥樣硬化疾病如冠心病、心肌梗死和腦中風密切相關。在這個風險序列中具有代表性的兩個位點rs10757274和rs10757278的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide pol

3、ymorphism，SNP）與冠心病的相關性尤其突出。同時這兩個位點與缺血性腦中風的風險增加也顯著相關。PAD作為一種普通的動脈粥樣硬化病變與冠心病和缺血性腦中風分享著相似或相同的病因和發(fā)病機制。據(jù)我們目前所知，關于9p21上動脈粥樣硬化病變易感位點與PAD相關性探討甚少，無論如何，9p21與糖尿病人群PAD的關聯(lián)研究尚未見文獻報道。
　　 本課題選取唐山市工人醫(yī)院2型糖尿病患者為研究對象，分析其PAD的患病情況和非遺傳性危險因

4、素，探討9p21上冠心病易感位點rs10757274和rs10757278和糖尿病人群PAD的關系以及這兩個位點與環(huán)境因素的交互作用對糖尿病人群PAD發(fā)生的影響，以期為糖尿病患者PAD的早期預防、治療和改善預后提供客觀依據(jù)。
　　 第一部分唐山市糖尿病下肢血管病變的發(fā)生率和非遺傳性危險因素的分析
　　 目的:觀察唐山市2型糖尿病患者下肢血管病變的患病情況和非遺傳危險因素。
　　 方法:采取整群抽樣的方法，從唐山市

5、3所三級甲等綜合性醫(yī)院中隨機抽樣，唐山市工人醫(yī)院作為調查醫(yī)院。本研究共入選年齡≥45歲2型糖尿病就診患者1389例，在研究人群中PAD人數(shù)為250例，非PAD人數(shù)為1139例。研究對象均被仔細登記一般情況和臨床資料，測量身高、體重、血壓和踝肱指數(shù)(ABI)，并檢測生化指標。兩組間比較采用t檢驗、秩和檢驗或卡方檢驗，危險因素分析使用Logistic回歸分析。所有的統(tǒng)計學分析應用SPSS16.0完成。
　　 結果:所選糖尿病患者中P

6、AD者為250人，PAD的患病率為18.0％(95％CI，16.0％-20.0％)。年齡、收縮壓(SBP)、糖尿病病程、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、吸煙、高血壓、冠心病和腦梗死在PAD患者與非PAD患者中差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);性別、體重指數(shù)(BMI)、舒張壓(DBP)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)在PAD患者與非PAD患者之間差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。糖尿

7、病患者PAD患病率隨著年齡增加而增加，卡方趨勢性檢驗表明有統(tǒng)計學意義（x2趨勢=128.423，p＜0.01），多變量logistic回歸分析顯示（變量包含性別、年齡、BMI、吸煙、血脂、HbA1c、糖尿病病程、高血壓、冠心病和腦梗死，下同。），年齡是糖尿病患者PAD患病的獨立風險因素(OR=1.084;95％CI:1.065-1.104; p＜0.01)。男性與女性糖尿病患者比較，PAD患病率差異無統(tǒng)計學意義（x2=0.412，P=0

8、.521），多變量logistic回歸分析顯示性別與糖尿病患者PAD患病風險無關(OR=1.428;95％CI:0.926-2.203; p=0.080)。糖尿病患者中BMI≥25者與BMI＜25者比較，PAD的患病率差異無統(tǒng)計學意義（x2=0.190，p=0.663），多變量logistic回歸分析顯示高BMI與糖尿病患者PAD患病風險無關（OR=1.063;95％CI:0.779-1.450; p=0.701）。吸煙與不吸煙者之間P

9、AD患病率差別有統(tǒng)計學意義（x2=8.048，p=0.005），多變量logistic回歸分析顯示吸煙是糖尿病患者PAD患病的獨立危險因素（OR=1.831;95％CI:1.232-2.721;p=0.003）。多變量logistic回歸分析顯示低HDL-C和高HbA1c與糖尿病患者PAD患病風險相關(HDL-C: OR=1.419，95％CI:1.021-1.971，p=0.037; HbA1c: OR=1.495，95％CI:1.0

10、34-2.161，p=0.033);糖尿病患者PAD患病率隨著糖尿病病程的增加而增加，卡方趨勢性檢驗有統(tǒng)計學意義（x2趨勢=32.249，p＜0.01），多變量logistic回歸分析顯示糖尿病病程≥15年者PAD患病風險是＜5年者2倍多，(95％CI:1.365-2.981，p＜0.01)。糖尿病患者中高血壓人群與非高血壓人群比較，PAD患病率差異有統(tǒng)計學意義(x2=13.813，p＜0.01)，多變量logistic回歸分析顯示高血

11、壓是PAD的獨立因素（OR=1.559;95％CI:1.140-2.133，p=0.005）;糖尿病患者合并冠心病、腦梗死者與非合并者比較，PAD患病率差別有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)，多變量logistic回歸分析顯示冠心病和腦梗死均是糖尿病患者PAD發(fā)生的獨立危險因素（冠心病:OR=2.060，95％CI:1.479-2.868，p＜0.01;腦梗死:OR=1.962,95％CI:1.385-2.780,p＜0.01）。
　　

12、 小結:本次調查中唐山市年齡≥45歲的糖尿病患者PAD的患病率為18％(95％CI，16.0％-20.0％)。年齡、吸煙、低HDL-C、高HbA1c、糖尿病病程、高血壓、冠心病和腦梗死是PAD發(fā)生的危險因素。
　　 第二部分9p21上位點多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關聯(lián)研究
　　 目的:探討9p21上位點多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關系。
　　 方法:本研究選取的糖尿病人群年齡≥45歲。所有糖尿病人群均隨機選自

13、唐山市工人醫(yī)院內分泌二科就診的2型糖尿病患者，其中PAD患者250例，年齡匹配的非PAD患者為252例。提取外周血DNA，應用飛行質譜(MALDI-TOF-MS)的技術完成樣品位點rs10757274和rs10757278單核苷酸多態(tài)性(SNP)的基因分型。
　　 兩組間比較采用t檢驗、秩和檢驗或卡方檢驗，危險因素分析使用Logistic回歸分析。所有的統(tǒng)計學分析應用SPSS16.0完成。應用haploview4.0評估基因位點

14、的哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)。
　　 結果:
　　 (1)糖尿病人群中PAD組和非PAD組rs10757274和rs10757278基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)。
　　 (2)在糖尿病人群中，這兩個位點的等位基因和基因型頻率在PAD組和非PAD組之間均存在著顯著的統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　 (3)在糖尿病人群

15、中，應用累加基因模型(additive model)進行分析，調整性別、年齡、吸煙、高血壓、血脂異常、HbA1c和糖尿病病程后，rs10757274是PAD患病的獨立風險因素（OR=1.537，95％CI:1.169-2.020，p=0.002）。進一步應用多變量logistic回歸分析調整其他因素后顯示，rs10757274的AG基因型使糖尿病人群PAD的患病風險提高了約1.5倍（95％CI:1.002-2.414，p=0.049），

16、GG基因型則使其提高了約2.4倍（95％CI:1.359-4.086，p=0.002）。同樣，應用additive model進行分析，調整上述因素后，rs10757278也是是PAD患病的獨立風險因素（OR=1.493，95％CI:1.140-1.955，p=0.004），進一步多因素顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風險提高了約2.2倍(95％CI:1.304-3.855, p=0.003)。
　　 (4)在排除大血

17、管病變的敏感性分析中，應用additive model進行分析，在多變量logistic回歸分析中調整性別、年齡、吸煙、高血壓、血脂異常、HbA1c和糖尿病病程等因素后顯示，rs10757274仍與PAD患病的獨立相關（OR=1.476，95％CI:1.057-2.061，p=0.022）。進一步應用多變量logistic回歸分析調整其他因素后顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風險提高了約2.2倍（95％CI:1.127-4.2

18、89，p=0.021）。同樣，應用additive model進行分析，調整上述因素后，rs10757278也仍與PAD患病的風險獨立相關（OR=1.437，95％CI:1.034-1.997; p=0.031）。進一步多因素分析顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風險提高了約2.1倍(95％CI:1.084-4.020, p=0.028).
　　 小結:9p21上rs10757274和rs10757278基因多態(tài)性與糖尿

19、病人群PAD的患病風險相關。
　　 第三部分糖尿病下肢血管病變中9p21位點多態(tài)性與其他因素的交互作用研究
　　 目的:探討糖尿病患者中對于PAD影響9p21上rs10757274和rs10757278位點多態(tài)性與環(huán)境因素之間是否存在交互作用。
　　 方法:所選糖尿病人群同第二部分。應用logistic回歸模型計算OR值和95％CI。所有數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行。
　　 結果:以下OR值均

20、為多因素logistic回歸分析所得，包括的因素為年齡、性別、吸煙、血脂異常、高血壓、HbA1c和糖尿病病程（不包括變量本身，年齡除外），其中年齡為連續(xù)變量。
　　 (1)年齡與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive model分析，在年齡＜65歲的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風險相關（OR=2.840，95％CI:1.579-5.109，

21、p＜0.05）;在年齡≥65歲的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.090)。同樣rs10757274的AG和GG基因型與年齡＜65歲之間不存在交互作用（p均＞0.05）。
　　 應用additive model分析，在年齡＜65歲的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風險相關（OR=2.371，95％CI:1.334-4.213，p＜0.05），在年齡≥65

22、歲的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.241)。同樣，rs10757278的GG基因型與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.266)。
　　 (2)性別與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive model分析，在男性糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風險相關（OR=1.770，95

23、％CI:1.159-2.701，p＜0.05），在女性糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與性別之間不存在交互作用(p=0.388)。同樣，rs10757274的GG基因型與性別之間不存在交互作用(p=0.382)。
　　 應用additive model分析，在男性糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風險相關（OR=1.665，95％CI:1.096-2.528，p＜0.05），在女性糖尿病患者中，

24、該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與性別之間不存在交互作用(p=0.521)。同樣，rs10757278的GG基因型與性別之間不存在交互作用(p=0.458)。
　　 (3)吸煙與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive model分析，在不吸煙的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風險相關（OR=1.710，95％CI:1.203-2.433

25、，p＜0.05），在吸煙的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與吸煙之間不存在交互作用(p=0.378)。同樣，rs10757274的GG基因型與吸煙之間不存在交互作用(p=0.353)。
　　 應用additive model分析，在不吸煙的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風險相關（OR=1.724，95％CI:1.214-2.447，p＜0.05）;在吸煙的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險

26、無關，然而這個位點與吸煙之間不存在交互作用(p=0.231)。同樣，rs10757278的GG基因型與吸煙之間不存在交互作用(p=0.236)。
　　 (4)血脂異常與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive model分析，在血脂正常的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風險相關（OR=2.140，95％CI:1.103-4.154，p＜0.05）

27、，在血脂異常的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與血脂異常之間不存在交互作用(p=0.099)。同樣，rs10757274的AG和GG基因型與血脂異常之間不存在交互作用（p均＞0.05）。
　　 應用additive model分析，在血脂正常的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風險相關（OR=1.964，95％CI:1.091-3.537，p＜0.05），在血脂異常的糖尿病患者中，該位點與PAD

28、患病風險無關，然而這個位點與血脂異常之間不存在交互作用(p=0.236)。
　　 (5)高血壓與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive model及該位點的AG和GG基因型進行分析發(fā)現(xiàn)，rs10757274及其AG和GG基因型與高血壓之間均不存在交互作用。
　　 應用additive model分析，在血壓正常的糖尿病患者中，rs10757278與P

29、AD患病風險相關（OR=1.668，95％CI:1.093-2.545，p＜0.05），在血壓異常的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與高血壓之間不存在交互作用(p=0.634)。同樣，rs10757278的GG基因型與高血壓之間不存在交互作用(p=0.642)。
　　 (6)高HbA1c與9p21上位點rS10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應用additive mode

30、l分析，在HbA1c正常的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風險無關，在高HbA1c的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險相關（OR=1.501，95％CI:1.103-2.042，p＜0.05），然而這個位點與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.942)。同樣，rs10757274的GG基因型與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.948)。
　　 應用additive model分析，在HbA1c正常的糖尿

31、病患者中，rs10757278與PAD患病風險無關，在高HbA1c的糖尿病患者中，該位點與PAD患病風險相關（OR=1.457，95％CI:1.076-1.973，p＜0.05），然而這個位點與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.899)。同樣，rs10757278的GG基因型與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.907)。
　　 (7)糖尿病病程與9p21上位點rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分

32、析
　　 應用additive model分析，在糖尿病病程＜15年的患者中，rs10757274與PAD患病風險相關（OR=1.584，95％CI:1.136-2.209，p＜0.05），在糖尿病病程≥15年的患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.870)。同樣，rs10757274的AG和GG基因型與糖尿病病程＜15年之間均不存在交互作用(p均＞0.05)。
　

33、　 應用additive model分析，在糖尿病病程＜15年的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風險相關(OR=1.528，95％CI:1.095-2.123，p＜0.05)，在糖尿病病程≥15年的患者中，該位點與PAD患病風險無關，然而這個位點與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.857)。同樣，rs10757278的GG基因型與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.749)。
　　 小結:在