康萊特注射液聯(lián)合放療對(duì)Lewis肺癌小鼠MDSC、HIF-1α表達(dá)的影響.pdf

1、目的:手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療等傳統(tǒng)惡性腫瘤治療方法難以解決惡性腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移問(wèn)題。腫瘤微環(huán)境的改變是腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。中醫(yī)藥能夠個(gè)體化、多層次、多靶點(diǎn)控制腫瘤生長(zhǎng)、對(duì)抗轉(zhuǎn)移、減少?gòu)?fù)發(fā)，與放化療結(jié)合，能夠增效減毒。臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)放療聯(lián)合康萊特注射液(Kanglaite，KLT)具有增效減毒作用。關(guān)于KLT對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響研究報(bào)道不多。本研究通過(guò)檢測(cè)KLT對(duì)Lewis肺癌小鼠放療敏感性的影響，進(jìn)一步探討KLT對(duì)髓系抑制細(xì)胞(myelo

2、id-derived suppressor cells，MDSC)的數(shù)目及缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表達(dá)的影響，進(jìn)一步分析KLT的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、體外培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞，取傳至3-4代生長(zhǎng)好的細(xì)胞接種于小鼠左腋皮下，建立Lewis肺癌移植瘤模型。觀察記錄小鼠的一般情況，如體重、進(jìn)食、活動(dòng)、毛發(fā)等情況。待腫瘤最長(zhǎng)徑為0.8-1cm時(shí)，挑選腫瘤大

3、小較均一的荷瘤小鼠24只，隨機(jī)分為對(duì)照組(control)、康萊特組（KLT）、放療組(RT)及康萊特聯(lián)合放療組（KLT+RT）4組，每組6只，生理鹽水(NS)處理組作為對(duì)照組，分別用KLT、NS+RT、KLT+RT處理;選取6只大小較均一的健康小鼠作為健康對(duì)照組(NC)。
　　2、各組小鼠干預(yù)處理結(jié)束后，脫頸方法處死小鼠，稱取小鼠的體重，完整剝離小鼠瘤組織及脾臟、肺臟，并測(cè)量瘤體大小。
　　3、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(re

4、al-time PCR，RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)各組小鼠瘤體和肺組織中HIF-1α基因表達(dá)。
　　4、采用流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)各組小鼠脾臟、瘤體中MDSC的數(shù)目及比例。
　　5、采用SPSS17.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫(kù)，將相關(guān)資料結(jié)果錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(％)表示，計(jì)量資料用(x)±s表示。多組樣本間均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析，組間多重比較應(yīng)用LSD檢驗(yàn)，各檢驗(yàn)均以P＜0.05

5、為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、各組小鼠一般情況:小鼠皮下接種Lewis肺癌細(xì)胞后約1周建模成功，約14天腫瘤生長(zhǎng)最長(zhǎng)徑為1.5-2.0cm。荷瘤小鼠進(jìn)食、活動(dòng)、毛發(fā)等一般情況逐漸變差，對(duì)照組小鼠最明顯。
　　2、各組對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤效應(yīng):對(duì)照組、KLT組、RT組、KLT+RT組平均腫瘤體積分別為（6.78±0.90）cm3、（6.52±0.92）cm3、（0.87±0.53）cm3、（0.08±0.30）c

6、m3，三個(gè)治療組的腫瘤體積均低于對(duì)照組，與對(duì)照組相比，KLT組小鼠腫瘤體積縮小，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），RT組、KLT+RT組小鼠腫瘤體積縮小，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;與KLT組相比，RT組、KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與RT組相比，KLT+RT組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(Table2)
　　3、各組小鼠腫瘤組織、肺組織中HIF-1α的基因表達(dá)的比較:健康

7、對(duì)照小鼠肺組織中不表達(dá)HIF-1α基因，Lewis肺癌小鼠瘤組織、肺組織中均表達(dá)HIF-1α基因，而腫瘤組織中HIF-1α基因的表達(dá)明顯高于肺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);實(shí)時(shí)熒光定量分析顯示，與NS組相比，KLT組小鼠瘤組織中HIF-1α基因表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;RT組HIF-1α基因表達(dá)水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);KLT+RT組表達(dá)亦較低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與KLT+RT組

8、相比，KLT組HIF-1α基因表達(dá)更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(Fig.3-8，Table3)。
　　4、各組小鼠腫瘤組織、脾臟組織中MDSC百分比的比較:健康對(duì)照小鼠脾臟中幾乎無(wú)MDSC表達(dá)，而Lewis肺癌小鼠脾臟、瘤組織中均存在MDSC表達(dá)，且瘤組織中MDSC表達(dá)較脾臟中高;流式分析結(jié)果顯示，與NS組相比，KLT組小鼠脾臟、瘤組織中MDSC百分比顯著較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，RT組脾臟及瘤組織中MDS

9、C百分比略升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);KLT+RT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與KLT+RT組相比，KLT組脾臟、瘤組織中MDSC百分比降低更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）(Fig.9-17，Table4)。
　　結(jié)論:
　　1、KLT可抑制Lewis肺癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)、增強(qiáng)小鼠免疫功能、改善缺氧狀態(tài)，其機(jī)制可能與抑制MDSC、HIF-1αmRNA表達(dá)有關(guān)。