線粒體途徑在棕櫚酸誘導INS-1細胞凋亡的機制探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察不同濃度棕櫚酸(palmitic acid,PA)對大鼠胰島INS-1細胞的脂毒性作用,探討線粒體途徑是否介導PA誘導的胰島β細胞INS-1凋亡及其可能機制。
　　方法:以大鼠INS-1胰島β細胞株為實驗對象,在含或不含PA(0.25-1.0mmol/l)的RPMI1640無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)24h,構建游離脂肪酸PA誘導β細胞INS-1脂性凋亡模型;MTT法測定線粒體琥珀酸脫氫酶活力,反映細胞線粒體功能改變;Hoech

2、st33342/PI活細胞熒光染色法觀察INS-1細胞核形態(tài)改變,測定細胞凋亡率;RT-PCR法檢測0.5mM棕櫚酸干預下細胞caspase-3、caspase-9、Bcl-2、AIFmRNA的表達。
　　結果:在無血清條件下,棕櫚酸干預24h能顯著誘導INS-1細胞凋亡。不同濃度PA處理INS-1細胞,鏡下可觀察到細胞呈濃度依賴的毒性改變。與正常細胞相比,PA組細胞隨PA濃度增加形態(tài)逐漸消失,多數(shù)細胞收縮甚至呈圓形。MTT法測定

3、線粒體琥珀酸脫氫酶活力,不同濃度棕櫚酸干預下,OD值降低顯著(p<0.05);Hoechst33342染色在熒光顯微鏡下觀察細胞的凋亡細胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染,可見明顯核碎裂。0.5mmol/LPA組細胞的凋亡率可達到56.6％,與同濃度對照BSA組相比有顯著差異(p<0.01,n=8);RT-PCR顯示促凋亡因子caspase-3、caspase-9、AIF表達較BSA組上調(diào),而抗凋亡因子Bcl-2表達下調(diào),提示內(nèi)源性即線粒

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