促紅細胞生成素預防阿霉素性心肌病的實驗研究.pdf

1、研究背景：阿霉素(doxorubicin，DOX)是臨床高效的抗腫瘤藥物，但其應用受限于劑量相關性心肌病。近年來有研究表明，促紅細胞生成素(erythropoietin，EPO)不僅具有促進紅細胞生成的作用，還有器官保護作用，但是否對DOX誘導的擴張型心肌病(dilatedcardiomyopathy，DCM)也有保護作用及其可能機制如何尚不明確。 目的：通過體內和體外實驗觀察EPO對DOX誘導的擴張型心肌病是否具有預防性保護作

2、用，并探討其可能機制。 方法： 1.體外實驗：新生裸鼠心肌細胞分離后分為四組，分別為對照組、DOX組、DOX+EPO組和EPO組。藥物處理24小時后進行凋亡和細胞形態(tài)分析。 2.體內實驗：39只Wistar大鼠隨機分為四組，分別為對照組、DOX組、DOX+EPO組和EPO組。經過2周藥物處理期和2周藥物洗脫期，對各組大鼠進行以下檢查：①超聲心動圖檢查，包括左室舒張末期內徑(LVEDD)、左室收縮末期內徑(LVES

3、O)、射血分數(EF)和短軸縮短率(FS)；②血流動力學檢查，包括：左室收縮壓峰值(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)以及左室壓力最大上升速率(+dP/dtmax)和最大下降速率(-dP/dtmax)；③組織病理學檢查；④凋亡分析；⑤免疫組化染色；⑥半定量逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)；⑦免疫蛋白印跡分析(Westernblot)。將各組數據進行對比并作統(tǒng)計學處理，P<0.05為有統(tǒng)計學差異。 結果： 1.體外

4、實驗：DOX使培養(yǎng)心肌細胞的凋亡指數明顯增高。DOX+EPO組的凋亡指數明顯低于DOX組，差異有統(tǒng)計學意義(1.54±0.74％vs8.36±1.21％，P<0.05)。 2.體內實驗：①超聲心動圖、血流動力學和組織病理學檢查結果表明，本研究成功建立了DOX誘導的大鼠DCM模型。②DOX+EPO組與DOX組相比較：LVEDD(4.70±0.27mmvs5.91±0.58mm)、LVESD(1.93±0.21mmvs3.54±0.

5、52mm)、EF(86.55±3.21％vs71.58±3.98％)、FS(59.89±2.52％vs40.35±4.74％)：LVSP(109.56±6.22mmHgvs89.54±4.33mmHg)、LVEDP(4.05±0.76mmHgvs9.17±1.36mmHg)、+dP/dtmax(6127.56±699.42mmHg/svs4197.60±626.32mmHg/s)和-dP/dtmax(5608.24±771.40mmHg

6、/svs4390.03±397.28mmHg/s)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，由此可見，預防性給予EPO明顯改善了DOX誘導的心功能減退。③組織病理學檢查顯示，DOX組中部分心肌細胞斷裂、丟失，萎縮心肌細胞增多，周圍出現代償性肥厚心肌細胞，心肌纖維化明顯增多，而DOX+EPO組上述情況明顯好轉。④凋亡分析表明，DOX組凋亡細胞呈小灶性分布，而DOX+EPO組與對照組類似，呈點狀分布，DOX組與DOX+EPO組之間的定量研究具有

7、統(tǒng)計學差異。⑤免疫組化和Westernblot均顯示：凋亡相關蛋白Bcl-2的表達在DOX組明顯低于對照組(0.41±0.05vs0.77±0.06，P<0.05)，而其在DOX+EPO組的表達接近對照組的水平；凋亡相關蛋白Bax的表達在DOX組明顯高于對照組(0.16±0.01vs0.04±0.01，P<0.05)，但其在DOX組與DOX+EPO組之間未見統(tǒng)計學差異。⑥RT-PCR研究顯示：與對照組相比較，DOX組的Bcl-2mRNA