內源性NO對裸鼠肝癌模型中HDAC4表達的影響.pdf

1、目的:觀察內源性一氧化氮(NO)對裸鼠肝癌模型中組蛋白去乙?；?(HDAC4)表達的影響,從而探討新的抗腫瘤思路。
　　 方法:切片組織來源于已經(jīng)建立好的裸鼠肝癌模型:4-5周齡雄性BALB/c裸鼠隨機分為對照組(腹腔注射0.2 ml生理鹽水)、5-氟尿嘧啶(5-FU,腹腔注射20 mg·kg-15-FU)、5-氟尿嘧啶+L-精氨酸組(5-FU+L-Arg,腹腔注射20 mg·kg-15-FU+100mg·kg-1L-Arg)

2、。隔日給藥1次,共3次。實驗結束以后處死動物,移植瘤組織部分進行福爾馬林固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,切片。光鏡下病理學觀察裸鼠移植瘤壞死的程度和范圍,免疫組化SP法檢測裸鼠肝癌模型對照組、5-FU組,5-FU+L-Arg組誘導型一氧化氮合酶(iNOS)與HDAC4的表達。按照切片內腫瘤組織壞死面積占腫瘤組織面積的百分比分為四個等級:425％(+),25％-50％(++),50％-75％(+++),＞75％(++++)。參照Mattern方

3、法判定iNOS與HDAC4的表達結果,未見染色為0分,輕度染色(淺黃色)為1分,中度染色(棕黃色)為2分,深度染色(棕褐色)為3分;陽性細胞百分比:未見染色為0分,染色細胞＜25％,為1分,25％-50％為2分,＞50％為3分。兩項得分相加0分判為陰性,1-2分為弱陽(+),5-6分為強陽(+++),3-4分介于二者之間(++)。
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對腫瘤壞死程度,iNOS與HDAC4在對照組、5-FU組,5-F

4、U+L-Arg組的表達結果進行等級資料的秩和檢驗,同時對iNOS與HDAC4在各組之間表達的相關性進行Spearman相關檢驗。
　　 結果:
　　 1.裸鼠移植瘤的病理學變化:鏡下觀察裸鼠移植瘤組織間有較多粗細不等的纖維組織將瘤細胞分隔成巢狀,部分呈腺腔狀排列,可見較多血竇結構。大多數(shù)癌細胞成三角形,胞漿豐富,胞核大小形態(tài)極不規(guī)則,核漿比例增大,可見較多病理性核分裂象。藥物處理后腫瘤組織出現(xiàn)不同程度的壞死,對照組5例(

5、+),4例(++),1例(+++);5-FU組4例(++),4例(+++),2例(++++);5-FU+L-Arg組2例(++),3例(+++),5例(++++),5-FU組、5-FU+L-Arg組與對照組相比均具有顯著性差異。
　　 2.免疫組化SP法檢測iNOS和HDAC4蛋白的表達結果:iNOS以粗或者細的顆粒表達于腫瘤細胞胞漿,部分表達于胞膜。iNOS在對照組、5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達呈平行遞增關系,每

6、兩組間比較有顯著性差異。HDAC4彌漫表達于腫瘤細胞胞漿和或胞核,間質細胞亦可見表達。HDAC4則在對照組、5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達成遞減趨勢,且每兩組間比較有顯著性差異。
　　 3.iNOS和HDAC4蛋白表達的相關性分析結果:經(jīng)Spearman等級相關分析表明,iNOS與HDAC4在對照組中無相關性,而在5-FU組、5-FU+L-Arg組中的表達成負相關。
　　 結論:
　　 ①裸鼠移植瘤組