缺氧誘導因子HIF-1α和HIF-2α在人腎癌中的表達及其功能的研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文缺氧誘導因子HIF1α和HIF2α在人腎癌中的表達及其功能的研究姓名：徐可申請學位級別：博士專業(yè)：泌尿外科指導教師：張元芳20070410復旦大學博士論文缺氧誘導因子HIF1a和HIF2d在人腎癌中的表達及其功能的研究(摘要)腎癌是最常見的腎實質惡性腫瘤，且發(fā)病率正在升高。腎癌生物學行為極為復雜，對放療和化療均不敏感，目前臨床上對于手術后患者和轉移性腎癌患者主要進行免疫治療。但常用的白介素2(IL2)和干擾素噸(IF

2、Nn)單藥治療的抗腫瘤活性一般，疾病緩解大多不能持久，另外大劑量IL2的毒性相當大，許多受試者不適合這種治療。低氧誘導因子HIF能增強其下游靶基因血管內皮生長因子(VEGF)、葡萄糖轉錄因子一I(GLUTI)和糖酵解酶等基因的表達，促進血管的生成和細胞能量代謝，其過度表達在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演著重要的角色。本課題首先應用RTPCR和WesternBlot方法檢測腎細胞癌組織和人腎癌細胞株7860以及OSRC2中缺氧誘導因子H

3、1FIa和mF2Ⅱ在基因轉錄水平和蛋白質水平上的表達情況，探討了HIFIⅡ和HIF2a與腎細胞癌發(fā)生發(fā)展過程的相關性。進一步構建了能夠穩(wěn)定表達H1FIQ和mF2Ⅱ基因的真核質粒，并轉染入人腎癌細胞株7860以及OSRC2中。采用化學合成法設計合成小干擾RNA(siRNA)，對轉染入細胞株中的H1F基因進行RNA干擾，明確合成的siRNA在基因和蛋白水平均能夠有效抑制HIF的表達。在此基礎上，通過Ml“r方法檢測其對腫瘤細胞增殖的影響，免

4、疫組化方法研究其對HIF下游基因ⅦGF等的影響。然后將裸鼠接種腎癌細胞和RNA干擾后的腎癌細胞，了解HIF基因對于致瘤性的影響。本課題采用RNA干擾方法研究缺氧誘導因子HIFId和HIF2Ⅱ對腎癌細胞增殖和腫瘤生長的影響，為腎細胞癌的基因治療提供了一定的實驗依據。第一部分HIF1Ⅱ和HIF2Q在腎細胞癌中的表達及意義目的：探討低氧誘導因子HIF1Q和H1F2a在腎透明細胞癌組織和人腎癌細胞7860和OSRC2中的表達及其臨床意義。方法：