逍遙散抗抑郁有效部位配伍的譜效關系研究.pdf

1、選題依據(jù):抑郁癥是一種常見的精神疾病，隨著人們生活節(jié)奏的加快，社會壓力的增大，人們的精神壓力也日益增加，導致抑郁癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其危害已越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的高度重視。逍遙散具有確切的抗抑郁作用，且有副作用低、復發(fā)率低等優(yōu)勢，因而可以從逍遙散中開發(fā)理想的抗抑郁新藥，但是對逍遙散抗抑郁的藥效物質基礎的研究尚未見文獻報道。眾所周知，中藥復方具有多組分協(xié)同作用的特點，由于中藥復雜性所引起的藥效物質基礎不明確、純度較低、質量不穩(wěn)定等諸

2、多問題，一直困擾著中藥的應用與現(xiàn)代化發(fā)展。因此，闡明逍遙散抗抑郁的藥效物質基礎，可以為該方的質量控制提供科學依據(jù)，同時為從中藥中研發(fā)療效更佳的抗抑郁新藥奠定基礎?！爸兴幾V效關系”是近幾年由中醫(yī)藥研究者提出的中藥藥效物質基礎研究新思路，其目的就是通過化學指紋圖譜與藥效之間的相互關系揭示中藥所含的化學成分與藥效之間的相互關系，從而闡明與藥效相關的化學物質基礎。本課題組對逍遙散做了大量的前期研究工作，已經(jīng)從逍遙散中篩選出了具有明顯抗抑郁活性的

3、有效部位，為逍遙散的藥效物質基礎研究奠定了堅實的基礎，然而，這些有效部位中哪些化學成分與藥效更加相關目前還不清楚。
　　目的:基于中醫(yī)整體觀和中藥譜效關系研究思路，將課題組前期篩選尋找到的有效部位經(jīng)配伍優(yōu)化設計成若干組份，探索逍遙散抗抑郁有效部位配伍的譜效關系，尋找與治療抑郁癥有關的化學成分，初步闡明逍遙散抗抑郁的藥效化學物質基礎。
　　方法:采用正交設計，研究逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6、X5配伍對行為絕望模型小鼠行為學

4、的影響，考察各部位對藥效的影響大小，并進一步考察其配伍對小鼠睡眠時間的影響;設計一系列與原有有效部位X7、 X6提取工藝相似的工藝，采用行為絕望模型及HPLC-UV檢測手段對有效部位的提取工藝進行優(yōu)化篩選;采用HPLC-UV建立逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6的指紋圖譜，并考察其工藝的穩(wěn)定性;對X7、X6兩個有效部位繼續(xù)進行配伍研究，運用行為學、生化指標等多種藥效指標綜合評價逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份的抗抑郁藥理作用，考察單獨的有效部位

5、X7、X6及其配伍后的藥效差異，并篩選最佳配伍組份;基于多源譜效關系研究思路，應用GC-MS、UPLC等色譜分析方法對配伍組份進行“譜”分析，結合各配伍組圖譜分析結果和藥效的關系，應用多種關聯(lián)分析法（主成分分析、相關分析、多元回歸分析等），建立譜效關系，客觀準確尋找與治療抑郁癥有關的特征峰，并對從圖譜中確定的對藥效貢獻大的化學成分進行單味藥材的歸屬和定性識別。
　　結果:1.實驗結果顯示逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6對抗抑郁藥效具

6、有顯著性影響，部位X5影響無顯著性意義，即部位X5對抗抑郁藥效貢獻較小，予以剔除，從而簡化了有效部位的配伍規(guī)模。研究結果也表明逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份能明顯縮短閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間，且其睡眠作用機制可能與文拉法辛相似。
　　2.篩選結果顯示硅藻土石油醚工藝所得提取物與原有提取工藝得到的有效部位化學成分相同且抗抑郁活性相當。鑒于硅藻土石油醚工藝其工藝可控性及操作可行性良好，易形成操作規(guī)程，因此用硅藻土石油醚工藝代替原

7、有提取工藝。在證明其工藝穩(wěn)定可靠的同時，本研究采用HPLC-UV建立了逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6的指紋圖譜。
　　3.運用行為學、生化指標等多種藥效指標成功評價了各配伍組份的抗抑郁藥效。實驗結果表明不同配伍組份由于所含化學成分含量差異，其抗抑郁藥效明顯不同，有效部位X6可增強有效部位X7的抗抑郁效果，顯示出一定的協(xié)同抗抑郁效果，佐證了中藥多組分，多靶點作用的合理性，且兩有效部位配伍后形成的配伍組份優(yōu)于單獨的有效部位。此外，本研

8、究篩選出了最佳的抗抑郁配伍組份，即當有效部位按生藥量計，X7、X6均為92.6 g/kg時，抗抑郁作用最佳，研究結果顯示其抗抑郁藥效接近甚至在一些指標上優(yōu)于陽性藥文拉法辛。
　　4.基于多源譜效關系研究思路，應用GC-MS、UPLC等色譜分析方法對由于化學成分含量差異引起藥效差異的逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份進行了“譜”分析。通過對各項指標的考察表明，本研究建立的分析方法均能達到指紋圖譜分析技術要求，所獲得的GC-MS、UPLC指

9、紋圖譜能夠全面、有效地反應有效部位配伍組份的的內(nèi)在主要化學成分。與此同時，對指紋圖譜中的特征峰進行了峰面積的測定。
　　5.結合各配伍組份圖譜分析結果和藥效的關系，應用相關分析、回歸分析等多種關聯(lián)分析法，相互驗證，建立譜效關系，尋找并指認出了一些與治療抑郁癥有關的化學成分:在基于GC-MS的譜效關系研究中，共尋找到9個活性成分，其中指認出5個（蒼術酮、藁本內(nèi)酯、棕櫚酸、白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅱ），未知化合物4個;在基于UPLC的譜效

10、關系研究中，共尋找到11個活性成分，其中指認出3個（歐前胡素、藁本內(nèi)酯、白術內(nèi)酯Ⅱ），未知化合物8個。并對這些化學成分進行了單味藥材的歸屬。分析結果表明有效成分主要來自于柴胡、當歸、白術三味藥材，進一步證明了該經(jīng)典名方中柴胡、當歸的君藥地位以及白術的臣藥地位。部分化學成分的抗抑郁活性已被文獻所證實，一定程度上證明了本研究所采用的譜效分析方法的客觀性與準確性。
　　結論:1.成功評價了由于化學成分含量差異引起藥效差異的逍遙散抗抑郁有

11、效部位配伍組份。通過考察發(fā)現(xiàn)有效部位配伍后形成的配伍組份優(yōu)于單獨的有效部位X7、X6，并篩選出了最佳的抗抑郁配伍組份，即當有效部位按生藥量計，X7、X6均為92.6 g/kg時，抗抑郁作用最佳。本研究為進一步基于有效部位配伍的譜效關系研究奠定了基礎，同時，本研究結果為新型抗抑郁組分中藥的研發(fā)提供了一定的參考價值。
　　2.基于多源譜效關系研究思路，運用GC-MS、UPLC等色譜分析方法及多種關聯(lián)分析法，建立譜效關系，成功尋找到一組