鱷膽汁提取物對肝癌SMMC-7721細胞抗癌機理研究.pdf

1、肝癌是一種原發(fā)于肝臟的惡性腫瘤。目前治療肝癌的藥物大多具有較大的毒副作用，因此，尋找敏感性高且毒副作用小的肝癌治療藥物具有重要的意義。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)鱷膽汁提取物能將肝癌細胞SMMC-7721周期阻滯于G0/G1期進而誘導其凋亡，但作用機制尚未闡明。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人肝癌細胞SMMC-7721為對象，深入探討鱷膽汁提取物抑制肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移的分子機理。熒光定量PCR、Western blot發(fā)現(xiàn)，鱷膽汁提取物能

2、明顯抑制肝癌細胞SMMC-7721的bcl-2、c-myc、survivin、hTERT致癌基因的表達，提高bax、p53、caspase-3抑癌基因的表達。結合本實驗室前期實驗結果提示，鱷膽汁提取物誘導細胞內ROS的升高，bax/bcl-2比例上升導致線粒體膜通透性增加，凋亡因子釋放。進而激活Caspase級聯(lián)反應，介導了p53、c-Myc、survivin參與的細胞凋亡過程。
　　 鱷膽汁提取物作用于SMMC-7721細胞前

3、后，細胞的全蛋白表達譜發(fā)生改變。蛋白雙向電泳和質譜分析共鑒定了21種表達差異的蛋白，其中PCNA、STMN表達顯著下調。RT-PCR、Western blot實驗證明，鱷膽汁提取物在轉錄和翻譯水平上抑制了PCNA、STMN的表達。本論文運用short hair RNA干擾技術及慢病毒轉染法構建了特異性干擾STMN的穩(wěn)定細胞系SMMC-7721-shSTMN和非特異性干擾的穩(wěn)定細胞系SMMC-7721-shCtrl。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)STMN干

4、擾的SMMC-7721-shSTMN組增殖速度顯著低于對照組。綜上所述，STMN可能是鱷膽汁提取物抑制肝癌細胞生長的分子靶點之一。
　　 另外，本文從體外細胞實驗研究了鱷膽汁提取物對肝癌細胞SMMC-7721的黏附、遷移和侵襲能力的影響。細胞黏附、劃痕、Transwell等實驗檢測發(fā)現(xiàn)鱷膽汁提取物能抑制肝癌細胞SMMC-7721的體外黏附、遷移和侵襲能力。Real-timePCR、Western blot、明膠酶譜法等方法研究表