miR-27b對大鼠H9C2心肌細胞中MCP-1表達的抑制作用.pdf

1、背景:
　　病毒性心肌炎(VMC)是嚴重危害人類健康的疾病。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)IL-17可上調小鼠心肌細胞中單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達，而MCP-1介導的VMC小鼠單個核細胞的遷移是VMC心肌組織炎癥細胞浸潤的重要機制之一。microRNA可以通過與靶mRNAs的3'-UTR末端的特定位點相結合，限制靶mRNAs翻譯或誘導該mRNA降解，從而參與基因轉錄后調控機制。本研究利用生物信息學數(shù)據(jù)庫預測，發(fā)現(xiàn)MCP-1可能為

2、miR-27b的靶基因，通過進一步研究大鼠H9C2心肌細胞中miR-27b對IL-17誘導下MCP-1表達的影響作用，探討miR-27b是否可以下調MCP-1的表達。
　　方法:
　　1.實驗分組:傳代培養(yǎng)H9C2心肌細胞株，按以下三種方式分組。
　　(1)在研究IL-17對MCP-1表達的影響中分6組，包括50ng/mlIL-17分別處理0h、2h、4h、8h、12h、24h的6個時效組。
　　(2)轉染miR

3、-27b類似體(mimics)后H9C2細胞中miR-27b的分析，包括轉染miR-27bmimics組、轉染miRNAmimics陰性對照組和空白對照組。
　　(3)在研究miR-27b對IL-17誘導下MCP-1表達的影響中分4組，即miR-27bmimics干預組（轉染miR-27bmimics+IL-17組）、miRNA陰性對照組（轉染miRNAmimics陰性對照+IL-17組）、IL-17組和空白對照組。
　　2

4、.利用siRNA-MateTM轉染試劑將miR-27bmimics轉染到H9C2細胞中。
　　3.采用SYBRgreen(I)實時熒光定量PCR法檢測H9C2心肌細胞中miR-27b和MCP-1基因的表達情況。
　　4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)分析H9C2心肌細胞培養(yǎng)上清液中MCP-1蛋白的表達情況。
　　5.采用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，多組計量資料之間的比較用單因素方差分析(OnewayANOVA

5、)，組間比較用LSD-t檢驗進行分析，檢驗水準取α=0.05。
　　結果:
　　1.IL-17對H9C2細胞中MCP-1表達的影響:IL-17作用2h后MCP-1的基因表達量開始升高，4h時達到高峰，之后開始下降;MCP-1蛋白的表達量在IL-17作用2h后開始升高，之后在4～24h逐漸升高。
　　2.轉染miR-27bmimics后H9C2細胞中miR-27b的分析:轉染miR-27bmimics組與轉染miRNAm

6、imics陰性對照組比較，miR-27b含量顯著升高;而轉染miRNAmimics陰性對照組與空白對照組比較，miR-27b含量無明顯改變。
　　3.miR-27b對IL-17誘導下MCP-1表達的影響:IL-17組與空白對照組比較，MCP-1mRNA和蛋白水平顯著升高(P＜0.05);IL-17組與miRNA陰性對照組比較，兩組的MCP-1mRNA和蛋白水平無顯著差異(P＞0.05);miR-27bmimics干預組與miRNA