依達(dá)拉奉對EAE大鼠的干預(yù)作用及iNOS、OPN的表達(dá)影響.pdf

1、目的:研究依達(dá)拉奉對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠的作用機(jī)制和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)在EAE發(fā)病中的作用,為治療多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)尋找新的途徑。
　　方法:
　　將72只健康成年雌性

2、Wistar大鼠隨機(jī)分為:正常組(N組)、EAE組、小劑量依達(dá)拉奉組(LDE組,4 mg/kg.d)、大劑量依達(dá)拉奉組(HDE組,10 mg/kg.d),每組18只。各組又隨機(jī)分為7天、14天、21天處死的三個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠。EAE組、LDE組、HDE組大鼠均需制備 EAE模型。將新鮮豚鼠脊髓制成勻漿,加上完全弗式佐劑(Complete Freund,s adjuvant,CFA)(含卡介苗10mg/ml),經(jīng)過乳化后按0.5m

3、l/只分別于大鼠四肢足墊和背部皮下注射,同時(shí)在大鼠四肢足背注射百日咳桿菌0.4ml/只,誘導(dǎo)EAE模型。EAE組不做任何處理,其余三組于模型制備第一天起腹腔注射相應(yīng)劑量的藥物,每天一次至處死為止。比較各組發(fā)病率并行神經(jīng)功能評分,取脊髓組織行HE染色、iNOS、OPN免疫組織化學(xué)染色觀察。
　　結(jié)果:
　　1.動物發(fā)病率觀察:N組中無大鼠發(fā)病;EAE組發(fā)病率為:83.33％;LDE組、HDE組大鼠發(fā)病率均明顯低于EAE組(P<

4、0.05);而且HDE組發(fā)病率低于LDE組(P<0.05)。
　　2.行為學(xué)觀察:在免疫第14天時(shí)各組大鼠神經(jīng)功能評分比較,N組、LDE組、HDE組評分均小于EAE組(P<0.05)。
　　3.組織病理學(xué)觀察:N組無炎性細(xì)胞浸潤外,其他組大鼠脊髓中均存在炎性細(xì)胞浸潤。在疾病開始時(shí)EAE組大鼠組織內(nèi)即出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤,且炎性細(xì)胞數(shù)目的多少與疾病嚴(yán)重程度相一致。在免疫第14天時(shí) N組、LDE組、HDE組炎性細(xì)胞浸潤數(shù)均明顯低于同

5、期的EAE組(P<0.05),HDE組炎性細(xì)胞浸潤數(shù)小于LDE組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在免疫第21天時(shí)N組、HDE組炎性細(xì)胞浸潤數(shù)與同期的EAE組之間比較均減少(P<0.05)。
　　4.iNOS和OPN表達(dá): N組大鼠脊髓中無iNOS、OPN表達(dá)陽性細(xì)胞;其他組大鼠脊髓中均存在iNOS、OPN表達(dá)陽性細(xì)胞。在免疫第14天時(shí)N組、LDE組和HDE組中iNOS、OPN表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)與同期 EAE組比較明顯減少(P<0.