一種基于錨定PCR的微衛(wèi)星篩選新方法的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、微衛(wèi)星是一種廣泛應用的遺傳標記。隨著研究的不斷深入，要求從基因組中大量篩選微衛(wèi)星位點。傳統(tǒng)的篩選方法雖然被普遍采用，但仍存在著許多缺點和不足，如需要構建基因文庫、內切酶的使用以及篩選出的位點重復率高等。文庫構建耗時、費力，且對技術、經驗要求較高；由于內切酶切點分布的隨機性，許多微衛(wèi)星位點克隆中僅保留極少部分側翼序列，因而無法設計引物；重復率高耗費了大量的經費和勞動力。本研究創(chuàng)建了一種基于錨定PCR的篩選方法，從東北虎基因組中篩選了大量的

2、微衛(wèi)星位點，有效克服了上述問題。 首先進行一個單引物PCR，在微衛(wèi)星重復區(qū)內設計單引物Str-ACN，并在引物3'末端錨定一個堿基。然后利用末端脫氧核糖核酸轉移酶在PCR產物的3'末端上加一poly-C結構。再利用另行設計的引物GG-N與Str-ACN配對進行雙引物擴增，擴增產物克隆測序后，得到的就是微衛(wèi)星位點的下游序列。根據(jù)此下游序列再設計一個引物Nest1，利用相同的原理向上游擴增，克隆測序得到上游序列，這樣就得到了完整的微

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