阿霉素化療耐藥通過激活信號傳導(dǎo)蛋白Smad3誘導(dǎo)富集CD133+肝癌干細胞.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活搠纛羔‰?，帨Y塋燃帑秈，硎，眥／7銘茄坼嬸堆務(wù)∞默另外，該學(xué)位論文為(憾辛加I廊桀≯方揚菇軌擬l智聲課題(組)的研究成果，獲得(爰1司珥)課題(組)經(jīng)費或?qū)嶒炇业馁Y助，在(帆蠶亍易腫脆訃礴實驗室完成。(請在以上括號內(nèi)填寫課題或課題組負責(zé)

2、人或?qū)嶒炇颐Q，未有此項聲明內(nèi)容的，可以不作特聲明人(簽名)：菇扛素歷、砌l∑年多只’日摘要摘要化療是晚期肝癌患者輔助治療的重要方法之一，但其效果不理想，腫瘤耐藥性的產(chǎn)生是重要原因之一。目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細胞與化療耐藥性產(chǎn)生密切相關(guān)。因此，研究肝癌化療耐藥與肝癌干細胞之間的相關(guān)性并闡明其耐藥機制，可以為晚期肝癌的治療尋找新的有效治療靶點。本研究通過運用化療藥物阿霉素(ADM)梯度溶度作用Huh751肝癌細胞，誘導(dǎo)耐藥細胞株Huh751／

3、ADM的形成，通過檢測比較Hull751／ADM與Huh751細胞之間表面標記物CDl33的表達差異及信號傳導(dǎo)蛋白Smad3的表達變化，并測試運用Smad3特異性抑制劑SIS3作用后耐藥細胞株CDl33表達的逆轉(zhuǎn)情況，初步探索化療是否可以誘導(dǎo)富集肝癌干細胞及其作用機制和尋找相關(guān)靶點。采用化療藥物梯度濃度誘導(dǎo)法作用于Huh751肝癌細胞，經(jīng)歷12個月構(gòu)建相對穩(wěn)定表達CDl33表面標記物的耐藥細胞株Huh751／ADM。通過CcK8實驗分析

4、比較Huh751和Huh751／ADM之間的對不同化療藥物的敏感性，qI盯一PCR比較兩者之間相關(guān)干性基因的表達差異，流式細胞儀分析比較兩者之間細胞凋亡以及肝癌干細胞表面標記物CDl33分子的表達差異。平板克隆形成實驗觀察Huh751和Huh751／ADM的增殖狀況。WestemBlotting檢測Smad3、pSmad3及各凋亡蛋白的表達情況以及使用Smad3特異性抑制劑sis3作用于Huh751／ADM穩(wěn)定的細胞株之后信號通路上各相

5、關(guān)蛋白的表達變化，并檢測其對化療藥物的敏感性，分析運用SIS3后細胞干性變化。實驗證明，運用ADM梯度濃度誘導(dǎo)Huh751細胞后建立了相對穩(wěn)定的耐藥細胞株Hull751／ADM，成功富集了CDl33標記的干細胞，且pSmad3蛋白表達增強，運用SIS3后，成功逆轉(zhuǎn)了CDl33的表達比例及干性的表達能力。綜上，ADM化療耐藥成功誘導(dǎo)富集了CDl33肝癌干細胞，且通過激活信號傳導(dǎo)蛋白Smad3作用，SIS3靶向此位點具有逆轉(zhuǎn)肝癌干細胞的作用