分子佐劑CpG、細(xì)胞因子對(duì)豬圓環(huán)病毒DNA疫苗的佐劑效應(yīng)研究.pdf

1、本研究用一段人工合成的CpG序列與豬圓環(huán)病毒PCVwhn株編碼CAP蛋白的基因(ORF2)共同構(gòu)建一種含CpG寡核苷酸的新型豬圓環(huán)病毒Ⅱ型基因疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-CpG)。將5種豬細(xì)胞因子IL-2，IL-4，IL-6，IL-6/4，IFN-γ及含CpG寡核苷酸的真核表達(dá)質(zhì)粒作為分子免疫佐劑，與本實(shí)驗(yàn)室保存的pcDNA-PCV-ORF2基因疫苗共同免疫仔豬，采用間接ELISA試驗(yàn)和流式細(xì)胞儀(FACS)分別對(duì)仔豬特異性抗P

2、CV2抗體IgG和外周血T淋巴細(xì)胞亞類CD<'3>+、CD<'4>+、CD<'8>+的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行檢測(cè)。 以本試驗(yàn)室申請(qǐng)的大規(guī)模提取質(zhì)粒的專利方法進(jìn)行基因疫苗和分子佐劑的制備，并以殼聚糖進(jìn)行包裹。 將基因疫苗pcDNA-PCV-ORF2和6種分子佐劑pcDNA-PCV-ORF2-CpG，IL-2，IL-4，IL-6，IL-6/4，IFN-γ，按照1：1的比例以250μg和500μg 兩種劑量肌注免疫仔豬，檢測(cè)仔豬的外周血

3、中CD<'3>+、CD<'4>+、CD<'8>+T淋巴細(xì)胞數(shù)和仔豬血清中特異性PCV2血清抗體IgG動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗免疫仔豬后，特異性抗體和T淋巴細(xì)胞數(shù)顯著升高，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。 pcDNA-PCV-ORF2-CpG 組免疫仔豬后，外周血T淋巴細(xì)胞有明顯的反應(yīng)性，CD<'3>+T淋巴細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組，差異極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)。但是各佐劑試驗(yàn)

4、組之間差異不顯著(P>0.05)。pcDNA-PCV-ORF2-CpG基因疫苗免疫仔豬后誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生了PCV2特異性抗體，與空載體及空白對(duì)照組相比，差異極顯著(P<0.01)；各佐劑試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05)。pcDNA-PCV-ORF2-CpG抗體水平高于pcDNA-PCV2-ORF2組，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，大劑量組優(yōu)于小劑量組。 豬細(xì)胞因子佐劑組免疫仔豬后，細(xì)胞和體液水平都高于未加佐劑組和對(duì)照組，差異極顯著(P<0.01

5、)或顯著(P<0.05)。細(xì)胞免疫方面IL-2，IFN-γ佐劑組的抗體水平要明顯高于其他佐劑組，差異顯著(P<0.05)，IL-2和IFN-γ佐劑組的CD<'3>+T淋巴細(xì)胞數(shù)在免疫仔豬后第35d達(dá)到最高。而IL-4，IL-6，IL-6/4佐劑組在體液免疫方面表現(xiàn)出明顯的佐劑效應(yīng)，與空載體組和對(duì)照組差異顯著(P<0.05)。其中IL-6佐劑組的抗體水平升高快，持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)(90d)。pcDNA-PCV2-ORF2基因疫苗和豬細(xì)胞因子共同

6、免疫仔豬后誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生了良好的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。 結(jié)果表明PCV2 DNA疫苗與以上佐劑的配合均能夠誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生良好的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，以CpG和IL-6的免疫增強(qiáng)作用最佳，IL-6/4，IL-2，IL-4和IFN-γ次之，并且呈劑量相關(guān)性。本研究應(yīng)用豬圓環(huán)病毒DNA疫苗和CpG及5種細(xì)胞因子為佐劑，以殼聚糖納米載體包裹后，按不同劑量肌肉免疫仔豬，探討了其體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，旨在為PCV2基因疫苗的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。應(yīng)用