抗菌肽Thanatin基因載體構(gòu)建和表達(dá)及提高植物對(duì)菌核病抗性的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、抗菌肽是生物體防御系統(tǒng)產(chǎn)生的一類(lèi)對(duì)外源病菌具有高效殺滅活性的小分子多肽,在植物抗病基因工程中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。Thanatin是刺肩蝽(PodisusmacuLiventris)成蟲(chóng)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種抗菌肽,由21個(gè)氨基酸殘基組成,該抗菌肽對(duì)細(xì)菌以及真菌都有很強(qiáng)的抗菌活性,本研究通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將其轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥和油菜,以提高植物的抗病性尤其是對(duì)菌核病的抗性。 1 Thanatin 的融合植物表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)GenBank登

2、錄的Thanatin序列設(shè)計(jì)引物,分別合成前端含信號(hào)肽和連接肽的基因片段,即SP-Thanatin和LP-Thanatin,分別克隆到pMD18-T載體上。通過(guò)SP-Thanatin3’端設(shè)計(jì)了BglⅡ切點(diǎn),LP-Tqaanatin 5’設(shè)計(jì)了Barn HI切點(diǎn),利用Bgl Ⅱ和Bam HI為同尾酶的特點(diǎn),LP-Thanatin BglⅡ/BamHI雙酶切片斷可多輪次替換SP-Thanatin上的終止密碼子(TAG)構(gòu)建成可剪切多拷貝抗

3、菌肽融合植物表達(dá)載體。結(jié)果鑒定1-5拷貝的Thanatin融合植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。 2 轉(zhuǎn)基因油菜和擬南芥的獲得通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)和In planta技術(shù)將1-5拷貝的Thanatin融合植物表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)化油菜和擬南芥,由于轉(zhuǎn)油菜的周期長(zhǎng)和效率低,目前我們只獲得5拷貝的T<,0>代轉(zhuǎn)基因油菜,而獲得了1-5拷貝的全部轉(zhuǎn)基因T<,0>代擬南芥,對(duì)轉(zhuǎn)基因油菜和擬南芥進(jìn)行菌核病抗性鑒定,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株中并無(wú)預(yù)期中的高抗菌核病類(lèi)型。

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