TLR2與TLR4在泌尿道的分布及對(duì)內(nèi)毒素侵襲后的表達(dá)變化研究.pdf

1、尿路感染是泌尿外科最常見(jiàn)的疾病之一，Maskell估計(jì)約50％的女性一生中有過(guò)尿路感染，全世界在尿路感染方面的花費(fèi)也是巨大的，如美國(guó)每年用于治療和預(yù)防尿路感染的費(fèi)用高達(dá)16億美元。尿路感染的病因有很多，如糖尿病、免疫抑制、妊娠及尿路結(jié)構(gòu)異常等都是目前所知道的尿路感染的易患因素，在尿路感染的眾多病原菌中，由G<'+>菌和G<'->菌引起的尿路感染共占90％左右。但是尿路感染的發(fā)病機(jī)制不清楚，尤其是宿主對(duì)病原體的識(shí)別及信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制不清。最新

2、研究顯示Toil樣受體(Toll-likereceptor，TLR)不僅與致病菌的識(shí)別有關(guān)，也與天然免疫的激活有密切關(guān)系。TLR的不同亞型可以識(shí)別不同的病原體，并通過(guò)MyD88等途徑激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)從而清除病原體。其中TLR2和TLR4分別與G<'+>菌和G<'->菌的識(shí)別有非常密切的關(guān)系，TLR2分布在細(xì)胞表面，能夠識(shí)別G<'+>菌的肽聚糖、脂多肽(lipopeptides)和脂蛋白，并激活不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路，而TLR4是脂多糖(l

3、ipopolysaccharide，LPS)受體復(fù)合物的一個(gè)非常重要的成分，是對(duì)G<'->菌的一個(gè)重要的“偵察”部分。目前還沒(méi)有尿路上皮TLR分布情況的研究。為此，我們進(jìn)行了兩個(gè)方面的研究。第一，取人腎小管、腎盂、輸尿管和膀胱上皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，染色鑒定，然后檢測(cè)TLR2和TLR4表達(dá)分布情況；第二，通過(guò)內(nèi)毒素刺激培養(yǎng)細(xì)胞，進(jìn)一步檢測(cè)TLR2和TLR4的表達(dá)變化。 主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1、采用Detrisac法獲取腎

4、小管上皮細(xì)胞，用膠原酶消化+刀片刮擦法得到腎盂、輸尿管和膀胱的上皮細(xì)胞，與單純的組織塊法與酶消化法相比，膠原酶消化+刀片刮擦法能夠更快獲取更多尿路上皮細(xì)胞。 2、角蛋白是上皮細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，用SABC法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行角蛋白免疫組化染色，可見(jiàn)細(xì)胞角蛋白著色，而對(duì)照組不著色。 3、提取各組總RNA，用半定量RT-PCR分析TLR2和TLR4表達(dá)分布情況，發(fā)現(xiàn)各組TLR2和TLR4均有表達(dá)，其中腎小管組表達(dá)量要明顯低于其余各