乙肝表面抗原大蛋白（S1S2S）基因三種不同表達載體轉化蘋果和番茄的研究.pdf

1、乙肝表面抗原大蛋白(Sls2s)基因三種不同表達載體轉化蘋果和番茄的研究摘要本文通過進一步對乙肝表面抗原大蛋白(SIS2S)基因轉化蘋果和番茄的離體再生體系、遺傳轉化體系及轉化方法等方面的研究，建立了高效遺傳轉化體系，獲得了攜帶$1S2S基因的轉基因植株，并對其進行了GUS染色鑒定和PeR檢測研究結果如下：1、優(yōu)化了蘋果品種‘涼香季節(jié)’的離體再生體系及遺傳轉化體系；通過根癌農桿茵介導法將三種不同啟動子調控的乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S

2、)基因分別導入‘涼香季節(jié)’中，獲得轉化植株。研究結果表明：‘涼香季節(jié)’組培苗葉片基部最適宜農桿菌的轉化；葉片及組培苗卡那霉素選擇壓分別為15mg／L和25mg／L；抗生素cb較Cef抑菌效果更好；GUS染色呈陽性的轉基因蘋果株系經PCR擴增，得到三種載體共有7個株系呈陽性(其中AG208有2個株系；AG206有3個株系；ATll0有2個株系)，初步證實S1S2S基因已整合到蘋果‘涼香季節(jié)’的基因組。2，應用超聲波輔助農桿菌介導法，對蘋果

3、‘紅愛佳’進行SIS2S基因轉化。利用gus基因瞬時表達的方法研究了超聲波處理時間、處理時期、處理功率、外植體類型的處理和農桿菌懸浮液中As濃度對SIS2S基因轉化率的影響。研究結果表明：當農桿菌浸染‘紅愛佳’葉片4min后，用功率為90W的超聲波處理30s，然后接種于再生培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天，能獲得最佳的gus基因瞬時表達率。最佳處理條件下轉化約600個‘紅愛佳’葉片，共得到138個抗性愈傷組織和11株坑性苗，轉化率為183％。3，以番

4、茄品種‘江蔬1號’為試材，Ms為基本培養(yǎng)基，研究了70％酒精和20／次氯酸鈉溶液的不同時間處理組合對其種子表面消毒效果和萌發(fā)的影響及不同基因型、植物生長調節(jié)物質的種類及其濃度組合等因素對番茄子葉再生的影響。用農桿菌介導法將S1S2S基因三種載體分別導入，并獲得了相應的卡那霉素抗性苗，對其進行了GUS組織化學染色鑒定及PCR檢測。研究結果表明：70％酒精處理50s后，再用20％次氯酸鈉溶液浸泡30min，‘江蔬1號’獲得98％的萌芽率：不

5、同的番茄品種在相同的培養(yǎng)基上其愈傷組織誘導率和不定芽的分化率存在著顯著差異，適于‘江蔬1號’子葉再生的培養(yǎng)基為MSZTO5mg／LIhh03mg／L，MSNAAO5mg／L為其適宜的生根培養(yǎng)基；對‘江蔬1號’進行農桿菌轉化后獲得了轉基因株系(AG208有71個株系、AG206有55個株系、ATll0有39個株系)，PeR檢測后得到AG208和AG206各有1個株系呈陽性。關鍵詞：蘋果；番茄；S1S2S基因；根癌農桿菌介導；超聲波輔助介導

6、；分子鑒定VInadditiontothat，thisthesisalsostudiedtheeffectsofdifferentgenetypes，thevarietyandconcentrationcombinationsofplantgrowthregulatedsubstanceontheregenerationoftomatocotyledonWein舡oducedthreevectorsofS1S2Sgeneintothep

7、lantbyAgrobacteriummediatedmethodandgotcorrespondingkanamyeinyoungplantsThetransgenieplantsweretestedbyGUSstainingandPCRassayTheseresultsshowedthatusing70％alcoholtotreat50seconds，thenused20％NaCIOsolutionstodip30minutes，‘

8、JiangsuNo1’Sgerminationratewas98％andnocontamination；DifferenttomatocultivarshadsignificantdifferenceincallusinducementrateandinfinitivebuddifferentiationrateatthesamemediumThesuitedmediumforcotyledonregenerationWasMSZT05

9、mg／I^IAA03m以ThesuitedmediumforrootgenerationWasMSNAA05mg／LThetransgcvicplantsof“JiangsuNo1’throughAgrobacteriwntransfommtion(71plantswithAG208，55plantswithAG206，39plantswithATllo)containedonlyonepositiveplantofAG208andAG