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文檔簡介
1、本研究擬采用單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)的方法分析三個常見的突變位點在中國人FHM家族中的表現(xiàn)形式.以進一步探討CACNA1A與FHM之間的關系.[材料和方法]1.研究對象:1)FHM病人組:家系A三代共8個患者(6女,2男),其中6個參加實驗;家系B三代共4個患者(4女),均參加實驗.2)FHM親屬組:家系A和B共12人.3)無FHM家族史的偏頭痛病人組:共53例有先兆偏頭痛,其中男性17例,女性36例.4)健康對照組:共8名女性,2名
2、男性健康對照,年齡與FHM相匹配.5)以上所有患者均根據(jù)國際頭痛學會(International Headache Society,IHS,1988年)分為無先兆的偏頭痛(Migraine without aura)和有先兆的偏頭痛(Migraine with aura)[1].2.實驗方法:2.1.引物的設計合成:應用生物信息學,從Genebank中查閱CACNA1A基因的mRNA和第13、16、17外顯子的序列,根據(jù)引物設計原則,并
3、利用Primer 5.0設計軟件,設計出擴增13、16和17外顯子的引物.設計的引物均位于各個外顯子相鄰的內(nèi)含子上,因此擴增的片段包括整個外顯子序列.2.2.基因組DNA的提取:酚/氯仿抽提法.2.3.PCR擴增CACNA1A基因的第13、16、17外顯子:第13,第16及第17個外顯子的反應條件均為:94℃4分鐘預變性,94℃1分鐘,55℃30秒,72℃45秒,共35個循環(huán),72℃延伸6分鐘.反應后檢測,取8 u lPCR擴增產(chǎn)物用2
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