家蠶表達重組人乳鐵蛋白及其口服治療潰瘍性結腸炎藥物研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)是主要存在于哺乳動物乳汁中的一種鐵結合糖蛋白，具有多種生物學功能，已成為在抗病毒、抗腫瘤和抗炎等領域備受矚目的潛在藥物開發(fā)對象。目前，用于藥物研究的LF主要來源于從哺乳動物乳汁中提取的天然LF和利用基因重組技術得到的重組LF，都需要經過純化、濃縮等加工過程，不僅產量低，而且工藝復雜、成本高，使藥物的開發(fā)和大規(guī)模生產都受到一定限制。
　　基于家蠶在我國資源豐富，易飼養(yǎng)，家蠶表達系統(tǒng)具有翻譯后修

2、飾的功能，且蠶蛹安全、可食等優(yōu)勢，并結合LF具有抗炎和調節(jié)機體免疫功能的特點，本研究利用含人乳鐵蛋白(hLF)基因的重組桿狀病毒感染家蠶蛹，在蠶蛹中表達重組人乳鐵蛋白(rhLF)，將表達rhLF的蠶蛹經勻漿、凍干成蠶蛹粉后通過口服對小鼠潰瘍性結腸炎(UC)進行治療，不經純化，可節(jié)省時間，降低成本，以探究一種新型、廉價的治療UC的方法。首先，將重組病毒vBm-hLF接種蠶蛹，在蠶蛹中成功表達了分子量80kDa左右的rhLF，且表達量最高可

3、達0.38mg/mL蠶蛹勻漿上清液，將蠶蛹凍干后檢測蠶蛹粉中rhLF的相對含量約為1.2mg/g。以E.coliTG1菌種為對象進行體外抑菌活性研究，發(fā)現rhLF蠶蛹粉能夠抑制其生長甚至將其殺死，表明rhLF具有良好的抑菌活性。為了初步評價rhLF蠶蛹粉的安全性，以最大給藥量(10g/kg)灌胃小鼠進行急性毒性試驗研究，觀察期內小鼠未表現出明顯的毒性反應，各主要臟器未見明顯異常，說明口服rhLF蠶蛹粉對小鼠的毒性極低。
　　在確定

4、了rhLF蠶蛹粉的生物學活性和安全性后，考察其對小鼠急性UC的治療作用。通過5％DSS誘導建立小鼠急性UC模型，分別以rhLF蠶蛹粉高、中、低(5、2.5、1.25g/kg)三個劑量給以灌胃，并以柳氮磺胺吡啶(SASP)和正常蠶蛹粉分別作為陽性和陰性對照，發(fā)現rhLF蠶蛹粉能明顯減輕小鼠的炎癥反應和結腸的炎癥損傷，降低DAI分數和MPO、OPN的含量，說明rhLF蠶蛹粉對小鼠急性UC具有一定的治療作用。為了進一步探究rhLF蠶蛹粉的作用

5、機制，ELISA檢測小鼠血清中IL-1α、IL-4、IL-6、IL-10細胞因子的含量，發(fā)現經rhLF蠶蛹粉治療后，血清中促炎細胞因子IL-1α、IL-6水平顯著下降，抗炎細胞因子IL-4、IL-10水平顯著上升，推測rhLF蠶蛹粉主要是通過調節(jié)細胞因子網絡平衡來促進結腸組織的炎癥恢復，達到治療UC的目的。
　　本研究在蠶蛹中成功表達了具有生物學活性的rhLF，初步探究了rhLF蠶蛹粉對小鼠急性UC模型的治療作用及作用機制，為今后