哺乳期磺胺間甲氧嘧啶暴露對(duì)仔鼠骨骼肌、腦發(fā)育及行為學(xué)影響.pdf

1、目的：研究哺乳期磺胺間甲氧嘧啶（Sulfamonomethoxine，SMM）暴露對(duì)仔鼠內(nèi)分泌、骨骼肌和腦發(fā)育及對(duì)仔鼠探索、焦慮、認(rèn)知等行為的影響，并探討mTOR信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)對(duì)其調(diào)節(jié)作用。
　　方法：ICR小鼠哺乳期以0、10、50、200 mg/kg灌胃SMM染毒，連續(xù)21 d，斷乳后其仔鼠雌、雄分籠正常喂養(yǎng)至出生后天數(shù)第63天（PND63)，每周稱(chēng)重1次；哺乳期內(nèi)測(cè)其體長(zhǎng)和頭圍。部分仔鼠斷乳后即剖殺，采集血清和主要臟器，稱(chēng)

2、量腓腸肌、肝臟、腎臟和大腦等臟器重量，計(jì)算其臟器系數(shù)；部分仔鼠PND50開(kāi)始，按照曠場(chǎng)、黑白巷、高架十字迷宮和Morris水迷宮順序進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束剖殺，采集血清。放射免疫法測(cè)定血清中生長(zhǎng)激素(Growth hormone，GH)，胰島素(Insulin，INS)，三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine，T3)，甲狀腺激素(Thyroxine，T4)，皮質(zhì)酮(Corticosterone，COR)，促腎上腺皮質(zhì)激素(A

3、drenocorticotropic hormone，ACTH)和雌激素(Estradio，E2)濃度；酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清中胰島素樣生長(zhǎng)因子1(Insulin-like growth factor-1，IGF-1)濃度；高效液相色譜法測(cè)定斷乳時(shí)血清SMM及代謝物乙?；疭MM(ACSMM)濃度；二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)法測(cè)定腓腸肌和腦組織總蛋白含量；氨基酸分析儀測(cè)定腓腸肌和腦組織游離氨基酸水平；實(shí)時(shí)定量-

4、聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chain reaction，RT-PCR)法測(cè)定腓腸肌和腦組織mTOR信號(hào)通路的基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：哺乳期SMM暴露的仔鼠，從PND1至PND63仔鼠體重各劑量組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與對(duì)照組相比，PND7時(shí)，各劑量組體長(zhǎng)、頭圍差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；PND14時(shí)，體長(zhǎng)各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但高劑量組頭圍顯著降低（P<0.0

5、5）；PND21時(shí)高劑量組體長(zhǎng)和頭圍均顯著降低（P<0.05）。PND21時(shí)，與對(duì)照組相比，骨骼肌、肝臟和大腦等臟器系數(shù)各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；但低、高劑量組腎臟臟器系數(shù)顯著降低（P<0.05）；高劑量組血糖和INS水平顯著降低（P<0.05）；GH，T4，T3和IGF-1水平各劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。PND63時(shí)，與對(duì)照組相比，中、高劑量組T4水平顯著下降（P<0.05）；中、高劑量組COR和AC

6、TH水平顯著升高（P<0.05）；中劑量E2水平顯著下降（P<0.05），而INS和T3水平各劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　行為學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示：與對(duì)照組雄鼠比較，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)低、中劑量組中央?yún)^(qū)域時(shí)間顯著增加（P<0.01），中劑量組站立次數(shù)顯著增加（P<0.01）。與對(duì)照組雌鼠比較，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)低劑量組中央?yún)^(qū)域時(shí)間顯著增加（P<0.01），中劑量組跨越格子數(shù)增加（P<0.05）；黑白巷實(shí)驗(yàn)高劑量組在黑端時(shí)間增加（P<0.05）。而

7、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)雄性和雌性仔鼠各劑量組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，與對(duì)照組比較，雄性仔鼠在第4天逃避潛伏期低、中、高劑量組顯著下降（P<0.05）；雌性仔鼠的逃避潛伏期高劑量組在第2,4,5天顯著下降（P<0.05）；游泳距離雌性仔鼠的高劑量組在第5天時(shí)顯著延長(zhǎng)（P<0.05）；游泳速度雌鼠的低劑量組在第3天時(shí)顯著下降（P<0.05）。
　　PND21時(shí)，仔鼠腓腸肌游離氨基酸，與對(duì)照組比較，中劑量

8、組的谷氨酸(Glutamic acid，Glu)，甘氨酸(Glycine，Gly)，丙氨酸(Alanine，Ala)，瓜氨酸(Citrullinr，Cit)，蛋氨酸(Methionine，Met)，組氨酸(Histidine，His)，鵝肌肽(Anserine，Ans)含量顯著升高（P<0.05），高劑量組的Cit和Ans含量也顯著升高（P<0.05），而低劑量組的Cit含量顯著降低（P<0.01）。PND21時(shí)，仔鼠腦組織游離氨基酸譜

9、，與對(duì)照組相比，中劑量組的?；撬?Taurine，Tau)，Glu和Ans含量顯著降低（P<0.05），但是低、中劑量組的Car均顯著升高，低劑量組的Ans顯著降低（P<0.05）。PND63時(shí)，雄性仔鼠腦組織游離氨基酸譜，與對(duì)照組相比，低劑量組組的必須氨基酸含量顯著增高（P<0.05），中、高劑量組的非必須氨基酸含量顯著增高（P<0.05），而高劑量組的支鏈氨基酸顯著降低（P<0.05）；中劑量組的Tau，Glu和γ-氨基正丁酸(Ga

10、mma amino butyric acid，g-ABA)，顯著升高（P<0.05），高劑量組的α-氨基正丁酸(Alpha amino butyric acid，a-ABA)，胱氨酸(Cysteine,(Cys)2,)，異亮氨酸(Isoleucine，Ile)和酪氨酸(Tyrosine，Tyr)顯著降低（P<0.05），而高劑量組的Glu和g-ABA顯著升高的（P<0.05）。而雌性仔鼠腦組織高劑量組的His含量顯著降低（P<0.01）

11、，中劑量組的精氨酸(Arginine，Arg)顯著升高（P<0.01）。
　　哺乳期SMM暴露對(duì)斷乳時(shí)仔鼠腓腸肌mtor，Pi3k3ca，Pi3k3cb，Akt1，Eif4ebp1和Rps6kb1各劑量組間的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；與對(duì)照組比較，腦組織低劑量組Mtor表達(dá)量顯著下降（P<0.05），中、高劑量組Mtor表達(dá)量顯著升高（P<0.05），Pi3k3ca，Pi3k3cb和Rps6kb1表達(dá)量中、高劑量組顯著升