黃曲霉毒素B1(AFB1)的分離、純化及AFB1人工抗原的高效合成研究.pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）是目前已知的兩百多種真菌毒素中毒性最強、污染頻率最高，寄生曲霉真菌(A.parasiticus)和黃曲霉(Aspergillus flavus)等產生的一組化學結構類似的二級次生產物，通過飼料或食品嚴重危害動物和人類的生命安全。在天然污染的食品當中，黃曲霉毒素B1（AFB1）最常見，其毒性、致癌、致畸性也最強。隨著生活水平的提高，食品安全已引起各國政府的特別關注。歐盟在2000年就提出了世界上最嚴

2、格的安全標準和檢驗標準，其中AFB1為2μg/kg，總AFT4μg/kg。由于AFB1污染十分嚴重，為避免此狀況的發(fā)生，人們迫切需要研究出一種高效經濟、快速、容易操作、精確且高普及性的AFB1檢測方法，對農副作物及產品的運輸、儲存、生產和銷售的各個渠道都能有效地監(jiān)查控制，使廣大消費者最基本的健康問題得到保障。AFB1檢測試劑盒具有快速、簡便、經濟等優(yōu)點備受青睞，但對于這種試劑盒的市場化開發(fā)需要AFB1和AFB1抗體做原料。本實驗把提取、

3、分離純化AFB1，AFB1的高利用率以及制備高效價、高特異性的抗體等因素綜合研究，為開發(fā)AFB1檢測試劑盒提供了重要的材料來源。
　　本研究主要內容包括：黃曲霉菌的培養(yǎng)及AFB1的提取純化；AFB1人工抗原的高效合成研究；以及AFB1抗血清的制備與研究。
　　在黃曲霉菌培養(yǎng)及AFB1的提取純化中：經過真菌培養(yǎng)；毒素提取；氧化鋁柱層析、硅膠柱層析分離純化；TLC、HPLC檢測；等步驟獲得AFB1精制品，純度達到95％以上。

4、r>　　在AFB1人工抗原的制備研究過程中：首先經過肟化反應制備AFB1肟（AFB1-O），AFB1的利用率高達94.2%；然后用碳二亞胺法制備AFB1人工抗原；最后根據AFB1與修飾過的牛血清蛋白（C-BSA）的不同起始摩爾比反應得到不同摩爾比的偶聯產物。
　　在AFB1抗血清的制備與研究過程中：將不同反應摩爾比所得人工抗原(AFB1-BSA)刺激Balb/C小鼠產生高特異性抗體；酶聯免疫實驗(ELISA)測定產生的抗血清效價；