精子相關抗原9(SPAG9)在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中的表達及意義.pdf

1、背景:
　　宮頸癌是女性第三常見的惡性腫瘤，在惡性腫瘤死亡率中占第四位，嚴重威脅女性健康。并且，全球超過85％宮頸癌新發(fā)及死亡病例發(fā)生于發(fā)展中國家。宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個多階段、多步驟、復雜的過程，從癌前病變發(fā)展為宮頸癌可經歷十余年時間，故宮頸癌是一種可預防、甚至可治愈的疾病。盡管，近些年來國內外逐漸普及宮頸癌的篩查工作，雖已使宮頸癌的發(fā)病率、死亡率有明顯下降，但是因宮頸液基細胞學檢查特異性以及敏感性不高，并且陰道鏡和宮頸活檢等

2、屬創(chuàng)傷性檢查，也存在漏診的可能。另外，宮頸病變的術前及預后監(jiān)測并不完善，目前尚沒有一種可靠的腫瘤標志物檢測。因此，尋找一種能為宮頸病變的早期篩查、臨床診斷及術后檢測提供幫助的新型腫瘤標志物顯得尤為重要。
　　目的:
　　檢測精子相關抗原9(SPAG9)在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)組織中的表達，并檢測SPAG9在宮頸病變患者血清內的免疫原性，評估其作為

3、新宮頸癌血清標志物的潛在價值。
　　方法:
　　1、研究對象:子宮頸病變組織及正常宮頸組織選取自山東大學附屬省立醫(yī)院2009年至2012年宮頸手術或活檢患者標本。新鮮子宮頸癌標本40例;宮頸上皮內瘤變(CIN)患者手術后石蠟標本35例、新鮮標本7例;對照組選取20例正常宮頸組織（因非宮頸病變而手術）。另外，40例子宮頸癌、40例CIN患者血樣均取自須行手術患者，另收集20例子宮頸癌術后返院化療患者、20例子宮肌瘤患者及10例

4、健康女性血樣做為對照。
　　2、研究方法:
　　(1)應用免疫組織化學(IFC)方法，明確SPAG9在各宮頸組織中的表達定位，通過對平均光密度值的檢測，比較正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變組織以及子宮頸癌組織中SPAG9的表達差異。
　　(2)應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測正常宮頸組織、CIN組織及宮頸癌組織中SPAG9的表達，并通過半定量分析各組間差異。
　　(3)通過Western Blot方法

5、檢測正常宮頸組織、CIN組織及宮頸癌組織中SPAG9的蛋白表達，進行半定量分析。
　　(4)應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測10例健康女性、20例子宮肌瘤患者、40例宮頸上皮內瘤變患者、40例宮頸癌患者以及20例宮頸癌術后返院化療、無復發(fā)患者的血清標本中SPAG9濃度差異。
　　結果:
　　1、免疫組織化學結果顯示，SPAG9主要定位于腫瘤細胞的細胞質和細胞膜上，間質中則極少量表達或不表達。SPAG9在正常宮頸組

6、、宮頸上皮內瘤變組及宮頸癌組中的表達量依次增強，且各組間表達的差異均有統(tǒng)計學意義。但SPAG9的表達與宮頸癌臨床病理學特征，無論在病理類型、組織學分型、臨床分期或有無淋巴結轉移等方面的表達差異均無統(tǒng)計學意義。
　　2、RT-PCR結果顯示SPAG9在正常宮頸組織中極少表達或無表達，而在宮頸癌組織中表達量明顯增高。通過對SPAG9mRNA在不同宮頸組織中表達的半定量分析顯示，在宮頸癌組織中平均表達量為0.815±0.553，而在正常

7、宮頸組織中為0.008±0.001，兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3、Western Blot檢測SPAG9蛋白在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達趨勢，與免疫組織化學以及RT-PCR的結果一致。半定量分析SPAG9蛋白在宮頸癌組織中平均表達量為0.929±0.908，正常宮頸組織中平均表達量僅為0.044±0.032，差異有統(tǒng)計學意義。
　　4、ELISA結果示10名健康女性血清中SPAG9平均血清濃度3.2343±1.05

8、79ng/mL，20例子宮肌瘤患者中為3.3561±0.7426ng/mL，兩組間差異無統(tǒng)計學意義。而在40例宮頸上皮內瘤變及40例宮頸癌患者血清中SPAG9的平均表達量分別為6.7015±3.3101ng/mL、15.1404±10.3839ng/mL，宮頸癌組高于CIN組高于子宮肌瘤及健康女性組，且各組間的差異均有統(tǒng)計學意義。另外，在20例宮頸癌術后返院化療、且無復發(fā)的患者血清中SPAG9平均濃度為3.6107±1.5069，較術前