基于核酸適配體的腫瘤細(xì)胞高靈敏電化學(xué)檢測(cè).pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康，其致死的主要原因是腫瘤細(xì)胞可以從原發(fā)位點(diǎn)脫離，進(jìn)入血液或淋巴循環(huán)，形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating tumor cells, CTC），并在別處形成新的腫瘤位點(diǎn)。由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞在生理樣本中含量低，樣本復(fù)雜度高，難以在早期被檢測(cè)出來(lái)，延誤了最佳治療時(shí)機(jī)，所以提高檢測(cè)的靈敏度以降低假陰性，增強(qiáng)特異性以降低假陽(yáng)性尤為重要。
　　核酸適配體是通過(guò)體外篩選得到的寡核苷酸片段，可以和相應(yīng)的配體高特異性、

2、高親和性地結(jié)合；而電化學(xué)檢測(cè)具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。本論文主要研究了利用腫瘤細(xì)胞特異性的核酸適配體修飾電極，并通過(guò)逐步優(yōu)化，顯著降低了檢測(cè)的背景值，提高了靈敏度，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞高特異性、高靈敏的快速檢測(cè)。
　　首先將BNL1ME A.7R.1(MEAR)肝癌細(xì)胞特異的核酸適配體 TLS1c由T15寡核苷酸連接分子（ss linker）共價(jià)修飾到玻碳電極表面，利用循環(huán)伏安法(CV)、差分脈沖伏安法(DPV)及交流阻抗法（EI

3、S）對(duì)MEAR細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示， TLS1c可以有效的修飾到電極表面，實(shí)現(xiàn)對(duì)MEAR細(xì)胞特異性檢測(cè)。
　　為了降低檢測(cè)背景值，我們首先對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行了預(yù)處理：將外周血離心處理，去除血漿，降低樣本復(fù)雜度。然后將TLS1c由雙鏈連接分子(ds linker)共價(jià)修飾到電極表面。相比于ss-TLS1c修飾電極，ds-TLS1c修飾電極顯著的降低了檢測(cè)的背景值，提高了檢測(cè)的靈敏度。此外，利用DPV對(duì)不同數(shù)目的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表