環(huán)境致癌物黃曲霉毒素B1轉化大鼠肝干細胞的表達譜分析.pdf

1、黃曲霉毒素B1(AFBl)是自然界中廣泛存在的環(huán)境污染物,它的長期暴露是肝癌發(fā)生的主要危險因素之一。本研究利用干細胞與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系,研究了環(huán)境致癌物AFB1誘導肝干細胞惡性轉化,并采用基因芯片技術從整體水平上刻畫轉化細胞轉錄組變化特征,對于理解環(huán)境污染物致癌機理具有非常重要的意義。
　　首先,大鼠肝卵圓細胞WB-F344經(jīng)黃曲霉毒素B1(0.03μM、0.1μM和0.2μM)作用下發(fā)生惡性轉化。發(fā)現(xiàn)轉化細胞出現(xiàn)大量轉化灶;轉

2、化灶細胞排列紊亂、重疊交叉生長、喪失了接觸抑制;軟瓊脂克隆形成實驗顯示,轉化細胞克隆形成率分別為0.8％、1.3%和2%;同時,肝干細胞特異基因YP、Vimentin、AFP、CK18等具有顯著改變,表明AFB1成功誘導WB-F344惡性轉化。
　　應用大鼠全基因表達譜芯片對轉化細胞基因表達譜進行檢測。共獲1315個顯著差異基因,且基因的下調表達趨勢占據(jù)了主導地位。通過差異表達基因聚類分析發(fā)現(xiàn)AFB1在中高劑量下對肝干細胞作用類似

3、;并從整體水平來看,基因在各組中的差異表達趨勢以一致上調或一致下調居多。通過功能分析發(fā)現(xiàn),差異表達基因功能類主要集中于在生物過程類上,顯示肝干細胞惡性轉化的發(fā)生與生物過程極為相關,其中細胞遷移、黏附、炎癥反應等這些GO與肝干細胞惡性轉化密切相關。通過通路分析發(fā)現(xiàn),不同劑量作用下顯著改變(p<0.05)的通路主要集中在MAPK信號通路、粘著斑通路、肌動蛋白細胞骨架調節(jié)通路等。表明肝干細胞惡性轉化可能通過影響這些通路上的關鍵基因造成的。最后

4、,通過差異表達基因作用網(wǎng)絡分析發(fā)現(xiàn),不同劑量作用下的核心基因主要集中在MET、CCL2、ITGA1、EGFR、COL1A1、ELN等,表明這些基因在肝干細胞惡性轉化過程中具有重要作用。
　　另外,本研究采用的芯片所有內含質量控制指標均達到了Phalanx的控制標準,樣本相關性和主成分分析均顯示了所期望的相關模式;同時應用熒光定量PCR技術對芯片數(shù)據(jù)結果進行驗證。本研究中所檢測到的基因能夠真實有效地反映它們表達的變化情況,數(shù)據(jù)具有較