不同表面種植體軟組織袖口臨床和組織學的比較研究.pdf

1、研究背景:
　　 種植材料應具有良好的生物相容性、穩(wěn)定的理化性能且便于加工。目前應用的種植體材料多數(shù)是鈦種植體，不少學者通過離子噴涂及鈦表面酸蝕技術或其理化方法（如激光蝕刻）改變種植體表面的形態(tài)特征，表面成分及增大接觸面積來提高種植體骨接觸率，以實現(xiàn)良好的初期穩(wěn)定性。然而，種植義齒要獲得長期穩(wěn)定的骨整合及良好的美學效果，軟組織整合也是其重要保障。目前越來越多的學者把種植體的研究熱點轉(zhuǎn)移到軟組織整合及軟組織美學效果上。
　　

2、 通常認為種植體在植入后能獲得良好的初期穩(wěn)定性的前提下，愈合3個月后，新骨的形成礦化較少，可達到骨形成和改建的穩(wěn)定性。新骨的礦化沉積率可以通過雙色熒光標記法進行測定。
　　 種植體周圍牙齦及粘膜軟組織可直接附著在種植體或基臺的表面，形成種植體軟組織袖口。多數(shù)種植體由光滑頸部及粗糙體部組成。因此種植體軟組織袖口直接與光滑表面接觸。臨床常常由于多種原因?qū)е路N植體周圍骨吸收，軟組織退縮致使軟組織袖口直接附著在粗糙表面，如種植體周圍炎

3、切除性治療后軟組織退縮、臨床種植體植入深度過淺或種植體過度負荷造成骨組織吸收，導致軟組織退縮，使種植體軟組織直接附著在粗糙的表面。臨床發(fā)現(xiàn)早期的Br(a)nemark種植體在軟組織袖口退縮后直接附著在機械表面，長期使用后，仍然能維持穩(wěn)定。種植體軟組織袖口如果退縮至粗糙的種植體表面，能否像光滑表面一樣獲得長期的穩(wěn)定性，是本實驗研究的目的。
　　 健康的種植體軟組織袖口有利于形成良好的生物學封閉，抵御外來細菌及微生物的侵襲。不同文獻

4、對軟組織袖口的研究尚未形成統(tǒng)一定論。有學者認為粗糙的種植表面有利于上皮細胞的生長及延伸，而光滑的種植體表面則細胞的形態(tài)較平坦，平鋪生長方向。緊密的上皮結(jié)合有利于生物學封閉的維持。粗糙的表面也有利于增加種植體骨接觸面積，同光滑表面相比，能有效的增加種植體的穩(wěn)定性。
　　 本課題旨在通過對不同表面種植體在愈合3個月后，臨床探診指標、新骨礦化沉積率以及組織學的觀察，比較不同表面種植體軟組織袖口的組織學特性。
　　 目的

5、　　 1.4只Beagle犬，拔除下頜雙側(cè)各4顆前磨牙延期植入不同表面處理方式的種植體，建立實驗動物模型。通過3個月的愈合階段，比較種植體植入后1個月、2個月、3個月時的臨床探診指標。
　　 2.實驗動物在處死前不同時間進行雙色熒光標記法，測量熒光條帶之間的距離，比較不同表面處理方式在種植體植入后3個月后新骨礦化沉積的速率。
　　 3.實驗動物處死后，制取下頜骨帶種植體標本，進行Micro-CT掃描，分析測量種植體螺紋

6、間成骨效應，比較不同種植體表面處理方式在愈合3個月后骨參數(shù)的差異性。
　　 4.制取標本后，通過塑料包埋技術，制作帶種植體骨磨片，顯微鏡下觀察不同表面處理方式種植體軟組織袖口的組織學特性。
　　 方法
　　 1.實驗動物
　　 選擇健康成年雄性Beagle犬4只，犬齡12～14個月，體重14.7～18.0kg。Beagle犬的齒式為2(I3/3，C1/1，Pm4/4，M2/3)，全口共42顆牙。所選實驗動

7、物生化指標正常，精神正常，無急性炎癥，無傳染性疾病，無慢性牙周病及齲病，咬合關系正常。飼養(yǎng)于中山大學動物實驗中心，獨立分籠圈養(yǎng)，定時定量飲食。
　　 2.實驗設計
　　 種植體設計與分組:由韓國奧齒泰種植公司惠贈，按照SSⅡ種植系統(tǒng)直徑4.1mm，長度10mm規(guī)格制作，要求制作表面不同處理方式及粗糙程度的種植體，體部和頸部均為同一種表面處理方式。根據(jù)不同表面處理方式分為4組，分別為MM組，RBM組，SA組和Bio-SA組

8、。4只Beagle犬拔牙后愈合3個月，測量缺牙區(qū)間的距離。設計每只Beagle犬每側(cè)植入5顆種植體，共40顆。每組表面處理種植體各10顆，采用隨機數(shù)字表法，編號植入。
　　 3.動物模型的建立
　　 4只Beagle犬適應一周后，即準備進行實驗。術前12h禁飲食，術前2h肌肉注射青霉素40萬u/d，速眠新和戊巴比妥鈉復合麻醉下，微創(chuàng)拔除下頜雙側(cè)各4顆前磨牙。術后3d肌肉注射青霉素80萬u/d，拍攝CT，定期觀察拔牙創(chuàng)愈合

9、情況。待拔牙創(chuàng)愈合3個月后，自牙槽嵴頂切開，翻開粘膜瓣，下頜雙側(cè)各植入5顆種植體。上愈合帽，術后3d肌肉注射青霉素80萬u/d。種植體植入手術由一經(jīng)驗豐富的種植專家完成。愈合3個月后處死實驗動物。
　　 4.臨床指標測量
　　 種植體植入后1w，觀察種植術區(qū)愈合情況。種植體周圍無感染，無松動脫落。分別于術后1個月、2個月、3個月進行臨床探診檢查。檢查種植體松動度、叩診聲音、測量菌斑指數(shù)(PI)、牙齦指數(shù)(GI)、齦溝出血

10、指數(shù)(SBI)、探診出血(BOP)及牙周探診深度(PD)。
　　 5.Micro-CT指標測量
　　 制取下頜骨標本后，先于10％福爾馬林液固定4d，然后轉(zhuǎn)移在70％酒精中浸泡。掃描時先用塑料保鮮膜包裹整個標本，避免標本干燥，影響組織學的觀察結(jié)果。掃描完成后繼續(xù)浸泡在70％酒精中。
　　 6.熒光標記測量
　　 4只Beagle犬在處死前13、14d按30mg/kg頸部皮下注射10mg/ml四環(huán)素，處死前

11、3d、4d按10mg/kg頸部皮下注射10mg/ml鈣黃綠素，固定標本，進行甲基丙烯酸甲酯包埋，使用Leica1600硬組織切片機切片，制作手工磨片，熒光顯微鏡下觀察兩種顏色條帶，并多次測量取條帶間的平均距離進行比較。
　　 7.組織學觀察
　　 制取標本后，10％福爾馬林液固定，梯度酒精逐級脫水，包埋液浸泡，升溫聚合，完成最終包埋，Leica1600切片厚，手工磨片，蕩洗，亞甲基藍-酸性品紅染色，封片，移至光學顯微鏡下

12、觀察。
　　 8.統(tǒng)計學分析
　　 應用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析。術后1-3個月4組PD的變化比較采用單個重復測量因素的方差分析;四種表面種植體骨分析指標BVF、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp比較、熒光于螺紋內(nèi)及遠離螺紋區(qū)域時四組間測量值的比較以及組織觀察長度比較采用單向方差分析（One-WayANOVA）;術后1-3個月，4組探診比較采用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗(KIndependentSamplesTest

13、)中的多組等級/頻數(shù)表資料的比較進行統(tǒng)計;四組種植體熒光測量于螺紋間和遠離螺紋的比較采用配對t檢驗(Paired-SamplesTTest)。檢驗水準為α=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1.大體觀察:
　　 各組動物均無死亡，術后飲食、活動規(guī)律正常，創(chuàng)口愈合良好，粘膜無紅腫、滲出，種植體及愈合帽無松動、脫落，存留率100％。4只Beagle犬拔牙后延期種植的動物模型成功建立。
　　 2.探診指標測量

14、>　　 經(jīng)過術后1個月、2個月、3個月臨床探診指標觀察，統(tǒng)計學分析比較。術后1個月、2個月、3個月時4組PD的變化比較無顯著性差異;術后1個月時4組探診比較BOP、GI之間無顯著性差異，認為4組探診出血及牙齦指數(shù)相當。PI和SBI均有統(tǒng)計學意義，認為MM菌斑沉積最少，其次為Bio-SA、SA、RBM。SBI指數(shù)MM組最低，其次為Bio-SA、RBM組和SA;術后2個月4組PI指數(shù)和GI指數(shù)無統(tǒng)計學意義。BOP和SBI四組比較有意義，認

15、為SBI指數(shù)和BOP均為MM組最低，其次為Bio-SA、SA和RBM組;術后3個月探診4組各項指標比較均無顯著性差異，認為3個月后，4種表面處理的種植體軟組織袖口健康指數(shù)相當。
　　 3.Micro-CT測量結(jié)果
　　 制取好的標本，通過Micro-CT掃描進行骨分析，通過測量BVF、Tb.N、Tb.Sp、Tb.Th來進行骨分析，通過統(tǒng)計學分析，比較結(jié)果顯示RBM組與SA組之間無顯著性差異，余兩兩比較均存在顯著差異。其中

16、Bio-SA組相對骨體積分數(shù)、骨小梁數(shù)量及骨小梁厚度最高，而MM組最低，骨小梁分離度MM組最高，Bio-SA反之。
　　 4.雙色熒光標記法測量結(jié)果
　　 處死實驗動物后，通過熒光顯微鏡觀察到雙色熒光標記帶?？拷N植體側(cè)為橙黃色熒光條帶，遠離種植體側(cè)為亮綠色熒光條帶。測量兩條條帶之間的距離/兩次給藥間隔時間，即可計算出新骨礦化沉積的速率。經(jīng)過統(tǒng)計學計算，螺紋內(nèi)熒光四組間測量值的比較各組之間無顯著性差異;比較四組種植體螺紋

17、間和遠離螺紋區(qū)域，結(jié)果顯示MM組和Bio-SA組熒光測量在螺紋間和遠離螺紋之間存在顯著性差異，而RBM組和SA組的熒光測量在螺紋間和遠離螺紋之間無顯著性差異。
　　 5.組織學比較
　　 通過塑料包埋制作骨磨片標本，經(jīng)亞甲基藍-酸性品紅染色后，可以成功的觀察種植體周圍軟硬組織的變化情況。其中軟組織被染成藍色、骨組織被染色成紅色。通過比較種植體軟組織袖口的組織學變化，發(fā)現(xiàn)不同軟組織袖口在上皮細胞的排列、附著及膠原纖維的生長

18、方向比較上，未見顯著性差異，均沿著種植體頸部向根部延伸生長。但是通過統(tǒng)計學比較種植體齦緣到種植體間的水平距離，光滑頸部及粗糙頸部之間具有統(tǒng)計學意義。顯示粗糙的種植體表面結(jié)合上皮貼合的更加緊密，更有利于生物學封閉的形成。
　　 結(jié)論
　　 1.Beagle犬的牙槽骨形態(tài)、骨質(zhì)密度與人接近，且容易飼養(yǎng)、生命力頑強，性格溫順，價格經(jīng)濟，是口腔動物實驗的首選。通過Beagle犬拔牙后采用延期植入種植體的方法，能成功的建立種植體骨

19、整合的實驗動物模型。
　　 2.4只Beagle犬種植術后精神狀況良好，探診結(jié)果認為4種不同表面的種植體的PD沒有統(tǒng)計學意義，PI、GI、SBI指數(shù)有些許差異，但均在正常范圍之內(nèi)，認為4種不同表面的種植體均能維持健康的軟組織狀態(tài)，3個月后均可獲得軟組織的穩(wěn)定性。
　　 3.Micro-CT測量分析3個月后新骨的生成情況，認為Bio-SA組具有最多的骨小梁數(shù)量及骨體積分數(shù)，而MM組骨小梁數(shù)量最少。
　　 4.熒光測

20、量及分析:比較不同表面處理方式新生骨礦化沉積率，顯示3個月后，MM組及Bio-SA組種植體螺紋內(nèi)仍然存在新骨生成，而遠離螺紋區(qū)域新骨生成較少。認為MM組和Bio-SA組種植體在3個月后種植體周圍新骨礦化相對較多。
　　 5.組織形態(tài)學觀察:通過制作帶種植體軟硬組織磨片，比較不同表面處理方式的種植體軟組袖口，認為結(jié)合上皮的生長、結(jié)締組織及膠原纖維的方向沒有顯著性差異，顯示，粗糙表面的軟組織袖口血管生成較多、纖維含量相對較少，光滑表