低劑量尼古丁通過EGR1通路拮抗Aβ介導的神經毒性.pdf

1、阿爾茲海默病是在老齡人群體中非常普遍的一種癡呆病,以記憶功能減退及認知功能障礙為主要臨床表現(xiàn)。而且,阿爾茲海默病患者還伴隨著語言障礙、視覺能力惡化以及運動協(xié)調功能喪失,最終導致死亡。阿爾茲海默病的病理特征則主要是大腦皮層和海馬區(qū)大量的淀粉樣蛋白Ap的聚集以及細胞內高度磷酸化的Tau蛋白形成的神經元纖維纏結。據預測,到2030年全球患老年癡呆的人數(shù)將達到6000萬。流行病學研究發(fā)現(xiàn),相對于不吸煙的人群來說吸煙者罹患阿爾茲海默病的發(fā)病率會有

2、所降低。但是,吸煙人群患阿爾茲海默病機率降低這種現(xiàn)象背后的機制仍然沒能得到清楚地闡述。即刻早期生長因子(early growth responsefactor-1,EGR-1)可以促進細胞的生長、分化,在氧化應激、凋亡及電離輻射的環(huán)境下也發(fā)揮著重要的作用。但EGR-1在阿爾茲海默病中的作用卻不清楚。
　　 主要在神經母細胞瘤SH-SY5Y絀胞系中,采用Western blotting、PCR技術和其他的分子生物學技術進行研究。我

3、們的研究發(fā)現(xiàn),10-6M的尼古丁可以劑量依賴性和時間依賴性活化即刻早期反應因子EGR-1基因的蛋白表達,在轉錄水平,通過普通PCR及real-time PCR研究分析可知尼古丁同樣可以刺激EGR-1基因的活化。而且,進一步的研究發(fā)現(xiàn)尼古丁介導的EGR-1基因的活化是通過激活MAPK/ERK信號通路的活化,當我們用shRNA將尼古丁乙酰膽堿受體nAchRα7進行干擾后,尼古丁介導的MAPK/ERK/EGR-1信號通路的活化,受到一定程度的

4、抑制,這說明尼古丁對神經母細胞瘤的這些刺激作用是通過對尼古丁乙酰膽堿受體α7(nAchRα7)的激活。流式細胞術檢測細胞的凋亡及測定細胞活力的MTT法發(fā)現(xiàn),10-6M Aβ25-35可顯著增加細胞的凋亡及降低了細胞的活力,而尼古丁可以降低由Aβ介導的神經毒性。流式細胞儀檢測細胞的早期凋亡發(fā)現(xiàn),10-6MAβ25-35處理的細胞組凋亡數(shù)目相對于對照組來說,凋亡細胞數(shù)明顯增加,從6.1％增加到13.25％。進一步通過Western blot

5、ting技術研究發(fā)現(xiàn),EGR-1可以上調細胞中周期蛋白cyclinD1的表達,而且細胞周期蛋白cyclinD1的蘇氨酸286位置上的磷酸化水平也隨著EGR-1的活化而增高,我們建立了EGR-1基因穩(wěn)定過表達和干擾的SH-SY5Y細胞系,同樣驗證了EGR-1基岡對細胞周期蛋白cyclinD1的正向調控作用,這可能是尼古丁降低淀粉樣蛋白Aβ25-35毒性的分子機制之一。
　　 我們的研究結果顯示,在阿爾茲海默病中,即刻早期反應因子E