雷公藤內酯醇和奧沙利鉑抗人結腸癌SW480細胞增殖及其機制研究.pdf

1、一、奧沙利鉑抗人結腸癌細胞株SW480增殖及其機制研究 目的：觀察抗腫瘤藥物奧沙利鉑對人結腸癌細胞株SW480體外增殖的影響，初步探討其作用機制。 方法：采用人結腸癌細胞株SW480作為研究對象，MTT法檢測不同濃度和作用時間的奧沙利鉑對細胞增殖的抑制作用；AO/EB熒光染色法觀察細胞形態(tài)的改變；流式細胞儀分析細胞周期的分布及凋亡的情況；免疫印跡法檢測細胞凋亡相關蛋白的表達。 結果：奧沙利鉑對SW480細胞的增殖

2、有抑制作用而且呈劑量和時間依賴性。奧沙利鉑作用48 h后，電鏡可見凋亡細胞及凋亡小體；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)細胞阻滯于S期，G2/M期細胞減少及出現(xiàn)凋亡峰；免疫印跡法顯示Bax表達增強，Bcl-2表達減弱。 二、人結腸癌耐藥細胞系SW480/L-OHP的建立及其生物學特性 目的：建立人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞系SW480/L-OHP，探討結腸癌對奧沙利鉑(Oxaliplatin，L-OHP)產生耐藥的特征規(guī)律和耐藥的機制。

3、 方法：采用逐步遞增L-OHP濃度，間歇作用體外誘導法培養(yǎng)建立了人結腸癌L-OHP耐藥細胞模型SW480/L-OHP。MTT法測定生長曲線、交叉耐藥性和耐藥指數(shù)；并用光鏡、電鏡、流式細胞儀(FCM)等方法觀察其一般生物學特性的改變。 結果：歷時6個月建成了L-OHP耐藥細胞模型SW480/L-OHP，其耐藥性能穩(wěn)定，耐藥指數(shù)為6.23；并且與順鉑、5-氟尿嘧啶、阿霉素等多種抗癌藥有不同程度的交叉耐藥性。SW480/L-OHP

4、的細胞形態(tài)發(fā)生了改變；體外細胞群體倍增時間較親代細胞延長26.45 h；細胞周期分析結果顯示其G0/G1，G2/M期細胞增多，S期細胞減少。 三、雷公藤內酯醇逆轉入結腸癌SW480/L-0HP細胞耐藥性的實驗研究 目的：探討雷公藤內酯醇( TPL)對結腸癌SW480/L-OHP細胞多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)的逆轉作用及其機制。 方法：采用MTT法檢測雷公藤內酯醇的內在細胞毒性及其對

5、奧沙利鉑(L-OHP)的增敏作用，并以逆轉倍數(shù)(RF)值評價其逆轉效果；應用流式細胞儀分析細胞內羅丹明123(rhodamine123，Rh123)濃度，免疫印跡技術檢測TPL對耐藥細胞HSP70表達的影響。 結果：TPL在4ng/ml和8ng/ml的無毒劑量下可明顯增強L-OHP的細胞毒性，RF分別為2.30和3.91。TPL使耐藥株細胞內Rh123外排減少，積聚增加。TPL作用48h后的SW480/L-OHP細胞，HSP70