乏氧誘導因子1α在骨肉瘤中的表達及其意義.pdf

1、目的：探討乏氧誘導因子-1a(HIF-1a)在骨肉瘤組織中的表達及臨床意義。并檢測體外乏氧條件下骨肉瘤SaOS-2細胞中乏氧誘導因子-1a(HIF-1a)的表達情況，探討乏氧激活HIF-1a的分子機制。 方法：(1)采用免疫組織化學方法(SP法)，檢測了25例骨肉瘤和10例正常骨組織中HIF-1a的表達，并對有關臨床和病理指標綜合分析。(2)通過體外培養(yǎng)骨肉瘤SaOS-2細胞達對數(shù)生長期后，在1﹪的氧濃度下分別培養(yǎng)8、12、24

2、小時，成功建立骨肉瘤細胞體外乏氧培養(yǎng)模型。(3)觀察乏氧培養(yǎng)不同時相(8 h，12h，24h)HIF-1a的表達并用免疫組化(SP法)及Rt-PER的方法檢測HIF-1a。用統(tǒng)計學方法對骨肉瘤細胞在常氧及乏氧不同時相HIF-1a的表達進行相關分析。 結果：(1)HIF-1a在骨肉瘤中表達陽性率為56﹪，而正常骨組織中均為陰性表達：HIF-1a的表達與年齡、性別、腫瘤的體積大小、Dahlin分型無關(P>0.05)，而與骨肉瘤臨床

3、分期和軟組織浸潤密切相關(P<0.05)。(2)乏氧處理一定時間后(8、12、24小時)，逆轉錄聚合酶鏈式反應(Rt-PCR)檢測HIF-1a mRNA的轉錄結果顯示，SaOS-2細胞系中HIF-1a mRNA常氧條件下就存在較高轉錄，隨著乏氧時間延長，mRNA的轉錄沒有明顯改變。(3)通過免疫組化SP法半定量檢測HIF-1a蛋白表達結果，SaOS-2細胞系在常氧條件下HIF-1a蛋白沒有表達或僅有少量表達，乏氧處理后，HIF-1a蛋白

4、表達顯著提高，與乏氧時間呈現(xiàn)直線相關(相關系數(shù)r=0.944)。乏氧作用24小時后，可見強表達的HIF-1a蛋白棕黃色顆粒，主要定位于細胞核。并且隨著乏氧時間延長，染色強度由中度陽性(++)，增強至強度陽性(+++)，統(tǒng)計學有顯著意義(p<0.05)。 結論：HIF-1a的高表達參與了骨肉瘤的惡性進展，可作為新的分子靶點應用于骨肉瘤診斷、基因治療和預后判斷。且在骨肉瘤SaOS-2細胞系中，乏氧對HIF-1 a信使RNA水平的影響