短發(fā)夾RNA對人舌癌Tca8113細胞生長增殖的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了探討通過RNA干擾（RNA interference，RNAi）抑制端粒酶活性途徑治療口腔腫瘤的可行性, 本課題選用人舌癌Tca 8113細胞為實驗對象。觀察靶向人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)的短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA ，shRNA）轉(zhuǎn)染人舌癌Tca 8113細胞后對細胞生長增殖的影響，RNA干擾前后細胞端粒酶活性及細胞形態(tài)的變化。

2、 在方法學上根據(jù)RNA干擾原理，利用構(gòu)建的表達shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表達質(zhì)粒（shRNA1），非特異性的shRNA真核表達質(zhì)粒（shRNA2），轉(zhuǎn)染試劑（德國 metafectene）和正常培養(yǎng)液處理細胞。24h后在共聚焦顯微鏡下檢測熒光表達情況； 24h、48h、72h用MTT法檢測細胞增殖活性； 48h后行HE染色觀察細胞形態(tài)、TRAP PCR-ELISA檢測細胞端粒酶活性。 果顯示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細

3、胞24h后,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組可見大量表達綠色熒光的細胞, shRNA1組出現(xiàn)大量懸浮的表達綠色熒光的圓形死亡細胞，貼壁細胞顯著減少；ELISA法顯示shRNA1組人舌癌Tca 8113細胞端粒酶活性顯著下降(P ﹤0.05)；HE染色發(fā)現(xiàn)shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細胞胞體縮小、核固縮，同等培養(yǎng)條件下與其它組比較，細胞生長密度變稀，見許多圓形死亡細胞；而且shRNA1轉(zhuǎn)染后舌癌Tca 8113細胞的生長增殖受到明顯抑制（P ﹤0.0

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