槲皮素對系膜細胞增殖、凋亡作用及其對細胞外基質、MCP-1分泌影響的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過觀察槲皮素(quercetin)對系膜細胞(MC)增殖、凋亡作用及其對Ang II誘導下細胞外基質(ECM)和LPS誘導下單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)分泌的影響，探討槲皮素對腎小球硬化的治療作用，為進一步的研究打下實驗基礎。 方法：體外培養(yǎng)大鼠系膜細胞株(HBZY-1)，采用不同濃度的槲皮素和相應干預因素作用，采用四甲基偶氮鹽滲入法(MTT法)檢測細胞增殖；采用流式細胞儀法檢測細胞周期及凋亡；采用酶連免疫吸

2、附法(ELISA)測量血管緊張素II(Ang II)誘導下纖維連接蛋白(FN)、IV型膠原(Col IV)以及LPS誘導下單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)在培養(yǎng)上清中的含量；采用免疫細胞化學方法檢測Ang II誘導下轉化生長因子β1(TGF-β1)在系膜細胞的表達情況。 結果： l.槲皮素對MC增殖的影響 在5-20umol／L濃度范圍內，槲皮素能夠時間、劑量依賴性地抑制系膜細胞的增殖。各實驗組與對照組之間；各

3、實驗組之間差異均有顯著意義(P<0.05)。 2．槲皮素對MC細胞周期的影響 各實驗組隨槲皮素濃度的增加，Go／Gl期細胞比逐漸增多，而S期細胞比逐漸下降，各組之間差異有顯著意義(P<0.05)。表明槲皮素可明顯抑制MC增殖，阻止細胞由Go／G1期進入S期。 3．槲皮素對MC凋亡的影響。 系膜細胞經槲皮素處理24h后，經流式細胞儀檢測細胞凋亡，結果對照組未出現(xiàn)明顯亞二倍體凋亡峰，槲皮素不同濃度各組均出

4、現(xiàn)亞二倍體凋亡峰。各組凋亡指數(shù)(％)與對照組相比，各組凋亡指數(shù)之間相比，差異均有顯著性意義(P<0.05)。 4．槲皮素對AngⅡ誘導下的MC纖維連接蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(ColIV) 等分泌的影響。 對照組相比，AngⅡ明顯上調MC培養(yǎng)上清中的纖維連接蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(ColⅣ)的分泌；而不同濃度的槲皮素對Ang Ⅱ誘導下的MC培養(yǎng)上清中的FN、ColⅣ的分泌與對照組相比明顯降低，。槲皮素濃度越高，F(xiàn)N和Co

5、lⅣ分泌越少，各組之間差異具有顯著意義(P<0.05)。 5．槲皮素對Ang Ⅱ誘導下的MC的TGF-β l表達的影響。 Ang Ⅱ誘導下的MC的TGF-β l表達明顯高于對照組；不同濃度的槲皮素對AngⅡ誘導下的MC的TGF-β 1表達與對照組相比明顯降低；各組之間，槲皮素濃度越高，TGF-β 1表達越低，各組之間差異具有顯著意義(P<0.05)。 6．槲皮素對LPS誘導下的MC的MCP-1分泌的影響。

6、 與對照組相比，LPS誘導下的MC的MCP-1分泌明顯增高；加入槲皮素能劑量依賴性地下調LPS誘導下的MC的MCP-1的分泌，各組之間差異有顯著意義(P<0.05)。 結論：(1)槲皮素可顯著抑制系膜細胞增殖，使系膜細胞阻滯于GO-G1期；且在較高濃度有誘導系膜細胞凋亡的作用；(2)槲皮素能劑量依賴性地減少系膜細胞在Ang Ⅱ誘導下的細胞外基質的分泌，其機制與其下調TGF-βl表達有關；(3)槲皮素尚能劑量依賴性地下調LPS誘導