細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1-2與誘騙受體3在胃癌BGC823細胞中相關(guān)性研究.pdf

1、胃癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤。諸多文獻中均有報道：ERK/MAPK信號傳導途徑能夠促進胃腸道腫瘤細胞的增殖，異?；罨軌?qū)е录毎麊适У蛲龊头只哪芰Γ偈辜毎麗盒赞D(zhuǎn)化。腫瘤細胞可通過異常表達Fas或使Fas功能失常而逃逸FasL誘導腫瘤細胞凋亡；同時，腫瘤細胞大量表達DcR3來競爭結(jié)合FasL逃避機體的免疫監(jiān)視。腫瘤的快速增殖、喪失凋亡、ERK的異?；罨cR3的大量表達，四者之間在時間上具有一致性。前期研究通過檢測胃癌患者腫瘤標

2、本、裸鼠模型的胃癌組織及各器官中DcR3與ERK1/2表達情況，得出以下結(jié)論：DcR3與ERK1/2在胃癌患者腫瘤標本及裸鼠模型器官組織中的表達量增高，并有一定的協(xié)同表達。并且DcR3與ERK1/2的表達情況與胃癌的分期及轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，晚期胃癌二者表達更為顯著，兩種信號因子與胃癌的發(fā)生發(fā)展可能有著密切聯(lián)系。為了更進一步闡明兩者關(guān)系，本實驗以胃癌BGC823細胞為研究對象，通過構(gòu)建ERK1/2shRNA真核表達載體，應(yīng)用特異性抑制劑U

3、0126、PD98059、APDC抑制通路中相關(guān)分子的表達，體外研究其對人胃癌細胞株BGC823ERK1/2蛋白及DcR3分泌及FasL活性的影響。
　　 合成針對人胃癌細胞株BGC823 ERK1/2基因的RNA干擾靶序列，將其連接于PRNAT-U6.1/Neo載體，構(gòu)建ERK1/2基因shRNA重組質(zhì)粒，經(jīng)脂質(zhì)體法導入BGC823細胞中，干擾ERK1/2的表達。應(yīng)用特異性抑制劑U0126、PD98059、APDC抑制通路中相

4、關(guān)分子的表達。Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后BGC823細胞及抑制劑使用后ERK1/2蛋白的表達變化，熒光顯微鏡檢測質(zhì)粒自帶GFP基因的表達情況確認轉(zhuǎn)染效率，ELISA法檢測各組細胞上清中DcR3分泌蛋白的表達特點。并利用本室制備的FasL，通過流式細胞術(shù)檢測ERK信號通路的變化對FasL作用的影響。收集各組細胞上清檢測DcR3分泌水平，ELISA結(jié)果顯示：DcR3表達在各干擾組中有不同程度下降；應(yīng)用特異性抑制劑改變BGC823細

5、胞ERK通路中相關(guān)分子表達從而抑制ERK1/2的表達，Western-blot結(jié)果證實特異性抑制劑能有效抑制ERK1/2表達，收集各組細胞上清檢測DcR3分泌水平，ELISA結(jié)果顯示：DcR3表達在各組中有不同程度下降；應(yīng)用FasL作用于ERK1/2表達改變組，流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：BGC823細胞早期凋亡、晚期凋亡率明顯上升，F(xiàn)asL活性提高。
　　 構(gòu)建成功的PRNAT-U6.1/Neo-ERK1/2干擾質(zhì)粒通過轉(zhuǎn)染293T細