探討腫瘤相關(guān)抗原OVA66的致瘤機(jī)制.pdf

1、OVA66 是本實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用重組cDNA 表達(dá)文庫(kù)血清學(xué)分析技術(shù)(SEREX)從卵巢癌文庫(kù)中篩選得到一個(gè)新的候選腫瘤相關(guān)基因，但是對(duì)于該分子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，目前的研究結(jié)果還是空白。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，OVA66 基因高表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，有利于細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。阻斷OVA66 基因的表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖降低，血管生成明顯減弱，并發(fā)現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象，提示OVA66 基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過(guò)程中可能具有重要的生物學(xué)功

2、能。為進(jìn)一步探討OVA66 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過(guò)程中的作用機(jī)制，本研究主要從以下兩個(gè)方面展開(kāi)： 一、腫瘤相關(guān)基因OVA66 的組織、細(xì)胞表達(dá)譜的分析及其相關(guān)作用基因 應(yīng)用RT-PCR 和免疫組化技術(shù)進(jìn)一步明確OVA66 基因在組織和細(xì)胞株中的表達(dá)格局。結(jié)果表明，OVA66 基因除了在睪丸中表達(dá)較高外，在其他正常組織中均低表達(dá)（如心臟，肝，肺，腎，子宮內(nèi)膜，骨骼肌，卵巢和外周血）或不表達(dá)（正常胃組織和部分卵巢組織）。在

3、大部分腫瘤組II織中OVA66 基因表達(dá)相對(duì)于正常組織則明顯升高；在大部分腫瘤細(xì)胞株（如SGC-7901，BGC823，MKN28，AGS，NCI-N87 等）和正常組織來(lái)源的細(xì)胞株（如WISH，張氏肝細(xì)胞及HL-7702）則呈現(xiàn)高表達(dá)；OVA66 蛋白在胃、結(jié)腸及卵巢的惡性腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于良性腫瘤組織。提示OVA66 基因在具有較強(qiáng)代謝和生長(zhǎng)能力的組織和細(xì)胞中的表達(dá)較高。 通過(guò)比較分析OVA66 低表達(dá)和高表達(dá)的卵巢癌

4、腫瘤組織標(biāo)本基因芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)，OVA66 基因高表達(dá)的卵巢癌組織中CCNE1,FOSL2 等基因表達(dá)上調(diào)，TP53,NME1 等基因表達(dá)則下調(diào)。 二、應(yīng)用基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選與OVA66 相互作用的基因和蛋白 在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以細(xì)胞株為研究對(duì)象，應(yīng)用基因芯片篩選與OVA66 表達(dá)調(diào)控相關(guān)的基因，結(jié)果表明OVA66 基因高表達(dá)的細(xì)胞株中FOSL2,VEGF,FOS 等基因表達(dá)上調(diào)，Itgal，Myt1l 等

5、基因表達(dá)下調(diào)。 進(jìn)一步驗(yàn)證了OVA66 基因可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。通過(guò)2-DE，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染OVA66 基因腫瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞相比有許多差異表達(dá)的蛋白。其中有參與糖酵解通路有關(guān)的多個(gè)蛋白（如丙酮酸激酶同工酶2、磷酸甘油酸激酶1、3-磷酸甘油醛脫氫酶等），提示OVA66 蛋白可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞的能量代謝途徑參與促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和增殖。熱休克蛋白家族成員HSC71 在高表達(dá)OVA66 的細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，提示OVA66 蛋白可