變形鏈球菌LuxS基因缺陷株的構建及密度感應分子AI-2活性的檢測.pdf

1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文變形鏈球菌LuxS基因缺陷株的構建及密度感應分子AI2活性的檢測姓名：韓福勝申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：于丹妮20070501天律醫(yī)科土學碩士學位論文及拖尾現象，分子量大小與預計大小相同。2經酶切鑒定目的質粒各片段插入無誤，插入片段測序顯示堿基無錯配，含目的質粒的大腸桿菌株可在紅霉素抗性的LB培養(yǎng)基內生長良好，紅霉素抗性基因可正常表達。3PCR方法擴增突變株LuxS、Eymr基因顯示，LuxS基

2、因已被完整敲除掉，證實篩選得到了LuxS基因缺失變鏈菌突變株。突變株不能誘導哈氏弧菌BBl70的生物發(fā)光，說明突變株不能再產生AI2類信號分子。經連續(xù)培養(yǎng)20代后證實，變鏈菌突變株具有良好的穩(wěn)定性。4變鏈菌UAl59的培養(yǎng)液過濾上清能夠誘導AI2報告菌株哈氏弧菌BBl70發(fā)光，表明變鏈菌株中含有m2分子合成基因，從而提示變鏈菌中存在Al2數量感應通路。而突變株不能誘導生物發(fā)光，說明LuxS基因成功敲除。結論：本研究利用AI2誘導發(fā)光檢測

3、法對變鏈菌培養(yǎng)上清液檢測，表明變鏈菌中含有群體感應信號分子AJ2的合成基因LuxS。采用嵌套式PCR擴增所需基因片段較傳統(tǒng)的PCR準確性更高，避免對帶有酶切位點的引物空間結構干擾而致的非特異擴增，提高了擴增的效率和準確性。本研究所構建的變鏈菌LuxS基因同源重組克隆載體正確，紅霉素抗性片段表達良好。通過電擊轉化法成功構建出變鏈菌LuxS基因缺失突變株，為下一步研究LuxS基因對變鏈菌致齲性的影響奠定基礎。關鍵詞：變形鏈球菌；密度感應；L