丹七方抗大鼠血小板聚集的蛋白質組學及藥動學研究.pdf

1、(1)丹參、三七為治療心血管疾病的傳統(tǒng)中藥,二者常配伍應用。為研究其主要活性組分丹參總酚酸和三七總皂苷抑制血小板聚集的活性,分別比較了兩類物質單用與合用對SD大鼠離體和在體血小板聚集率的影響。體外實驗表明,丹參總酚酸、三七總皂苷均能抑制ADP誘導的大鼠洗滌血小板和富血小板血漿中血小板(PRP)聚集,但無協(xié)同效應。以550mg·kg-1連續(xù)灌胃給藥5d后,丹參總酚酸與三七總皂苷均能顯著抑制ADP誘導的大鼠體內富血小板血漿中血小板(PRP)

2、的聚集性,當?shù)⒖偡铀崤c三七總皂苷的比例為5:1時,協(xié)同抗ADP誘導的大鼠體內PRP聚集作用最佳。同時還研究了丹參中作用最強的單體成分丹酚酸B,發(fā)現(xiàn)它能顯著抑制ADP誘導的大鼠體外洗滌血小板聚集,IC50為67.33±1.22μg·mL-1。
　　 (2)為進一步闡明丹參總酚酸、三七總皂苷、丹酚酸B抑制ADP誘導的血小板聚集的作用機制,本實驗建立了丹參總酚酸、三七總皂苷、丹酚酸B處理前后血小板總蛋白質的雙向電泳圖譜,利用MALD

3、I-TOF-MS技術識別并鑒定了兩不同組別血小板蛋白質問差異表達蛋白質。這些差異表達蛋白質與鈣平衡、血小板激活、細胞跨膜信號轉導、物質能量代謝、抗氧化系統(tǒng)及細胞骨架密切相關,并應用免疫印跡法驗證了部分差異蛋白質的表達水平。
　　 (3)采用HPLC-UV,建立了丹參總酚酸與三七總皂苷合用(5:1)灌胃給藥后大鼠血漿中原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量同時測定方法,并對其進行藥動學研究。色譜柱:Zorbax SB-C18 c

4、olumn(250 mm×4.6 mm,5μm)、；流速:1 mL·min-1；柱溫:30℃；檢測波長:280nm,以乙腈和0.026％磷酸水溶液梯度洗脫,血漿樣品以體積分數(shù)為10％的鹽酸酸化,而后用乙酸乙酯萃取兩次,并根據測定結果求算主要藥動學參數(shù)。結果,四種成分的日內與日間RSD％均小于15％,提取回收率均大于70％,線性關系良好(r>0.99)。原兒茶醛在10.0min達峰,Cmax為6.466μg·mL-1,AUC0-240值為

5、82.0μg·min·mL-1,迷迭香酸在11.7min達峰,Cmax為10.50μg·mL-1,AUC0-240值為446.6μg·min·mL-1,紫草酸在20.8min達峰,Cmx為5.950μg·mL-1,AUC0-240值為486.7μg·min·mL-1,丹酚酸B在8.33min達峰,Cmax為48.12μg·mL-1,AUC0-240值為1766μg·min·mL-1。
　　 (4)運用HPLC-UV法檢測大鼠灌胃