斑蝥酸鈉維生素B6對肝癌MAPK、JAK-STAT信號轉導通路的調控作用.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是人類常見的惡性腫瘤之一，嚴重的危害我國人民的生命和健康。研究表明酪氨酸蛋白激酶信號轉導系統(tǒng)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在肝癌細胞的信號轉導鏈中涉及多種信號轉導途徑，起主要作用的有促進細胞增殖并調節(jié)基因轉錄的Ras/Raf/MAPK途徑和調節(jié)效應基因轉錄的JAK-STAT途徑。中藥斑蝥具有抗腫瘤活性，對宮頸癌、鼻咽癌、皮膚癌、骨髓瘤、白血病、卵巢癌及肝癌細胞等有抑制作用。本研究利用斑蝥活性成分斑蝥酸鈉維生素B6（Sodi

2、um Cantharidinate and Vitamin B6，SCVB6）作用于肝癌SMMC-7721細胞株，以MEK途徑特異性抑制劑PD98059及U0126作為對照，觀察SCVB6對肝癌細胞的MAPK、JAK-STAT信號通路的影響。
　　 方法：1、MTT法檢測SCVB6、SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126對肝癌SMMC-7721細胞株增殖的影響；
　　 2、RT-PCR法檢測SCVB6、SCV

3、B6+PD98059、SCVB6+U0126對肝癌SMMC-7721細胞erk、stat3、stat5、c-junmRNA的影響；
　　 3、Western blotting法檢測SCVB6、SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126對肝癌SMMC-7721細胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達的影響；
　　 4、激光共聚焦顯微鏡檢測SCVB6、SCVB

4、6+PD98059、SCVB6+U0126對肝癌SMMC-7721細胞 ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達的影響。
　　 結果：1、MTT結果示：SCVB6能夠抑制SMMC-7721細胞增殖，呈濃度-時間依賴性。PD98059或U0126與SCVB6聯(lián)合應用48h后對細胞增殖的抑制率升高，與單獨應用SCVB648h相比差異有顯著性（P<0.05）。
　　 2、R

5、T-PCR結果示：SCVB6作用于肝癌SMMC-7721細胞48h后，erk、stat3、stat5、c-jun mRNA表達量均有明顯下降，與對照組比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126組作用于SMMC-7721細胞48h后，erk、stat3、stats、c-jun mRNA的表達量比對照組降低，差異有顯著性（P<0.05）。與SCVB6組相比較，SCVB6+PD9805

6、9、SCVB6+U0126組erk、stat3、stat5 mRNA的表達量降低，差異有顯著性（P<0.05）。
　　 3、Western blotting結果示：SCVB6作用于肝癌SMMC-7721細胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達量均有下降，與對照組比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126作

7、用于SMMC-7721細胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達量和對照組比較顯著降低（P<0.05）。與SCVB6組相比較，SCVB6+PD98059作用于SMMC-7721細胞48h后蛋白STAT3、P-STAT3、C-JUN表達量均有下降，差異有顯著性（P<0.05）。SCVB6+U0126組與SCVB6組相比較ERK、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C

8、-JUN蛋白表達量下降，差異有顯著性（P<0.05）。
　　 4、激光共聚焦結果示：SCVB6作用于SMMC-7721細胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN抗體的熒光強度均較對照組降低，其中P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN更明顯。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126組ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-S

9、TAT3、P-STAT5、C-JUN抗體的熒光強度均顯著降低。
　　 結論：1、SCVB6能下調肝癌細胞erk、stat3、stat5、c-junmRNA表達水平，降低ERK、STAT3、STAT5蛋白激酶的磷酸化水平及下游信號C-JUN的表達，從基因轉錄和蛋白活化兩個水平抑制MAPK、JAK-STAT通路及其下游信號的傳遞，從而抑制腫瘤細胞的增殖。
　　 2、SCVB6能增強PD98059、U0126對肝癌細胞增殖的抑