殼寡糖-硬脂酸嫁接物納米顆粒對人單核細胞損傷作用研究.pdf

1、目的：
　　 納米技術是一門新興的技術，它已廣泛應用于生產、生活的各個領域，如新藥開發(fā)、生物標志物發(fā)現和分子診斷技術等。隨著納米技術的迅速發(fā)展及納米材料的大量增多，納米技術的安全性問題正引起世界范圍的重點關注。近年來研究發(fā)現不同途徑接觸的納米材料都可以進入血液循環(huán)，可能對血細胞及凝血功能產生影響，因此納米材料對血液系統(tǒng)的潛在毒性也深受關注。
　　 聚合物膠團是近幾年正在發(fā)展的一類新型納米藥物載體，具有增溶、靶向、長循環(huán)等

2、優(yōu)點。殼寡糖-硬脂酸嫁接物膠團(納米顆粒，CSO-SA)是本校藥學院正在研發(fā)的納米載體，期望能夠作為抗腫瘤藥等藥物的載體而優(yōu)化給藥系統(tǒng)。這就使得該納米顆?？赡鼙恢苯幼⑸淙胙?，與血細胞和血管內皮接觸，因此對其血液系統(tǒng)毒性的評價至關重要。
　　 體內體外研究發(fā)現多種納米顆?？梢哉T導活性氧簇(ROS)的過量生成和炎癥反應，這可能是納米顆粒對心血管系統(tǒng)產生有害效應的主要機制。本研究主要觀察了CSO-SA納米顆粒對體外培養(yǎng)的人單核細胞的損

3、傷情況及氧化損傷機制。
　　 方法：
　　 1.細胞毒性檢測
　　 用倒置顯微鏡觀察CSO-SA(0、10、20、50、100、200、400、800μg/ml)處理24h后THP-1細胞形態(tài)變化；用透射電鏡觀察20μg/mlCSO-SA處理0、6、12、24h后THP-1超微結構改變。
　　 用PI染色法觀察CSO-SA(0、10、20、50、100、200、400、800μg/ml)處理24h后和20

4、、50μg/mlCSO-SA處理0、6、12、24h后THP-1的死亡情況。
　　 用改良MTT法(CCK-8)檢測CSO-SA(0、10、20、50、100、200μg/ml)處理24h后和20μg/mlCSO-SA處理0、6、12、24、36、48h后THP-1細胞的相對存活率。
　　 2.氧化還原狀態(tài)檢測
　　 CSO-SA(0、2，10、20μg/ml)處理細胞24h后，用DCFH-DA法檢測THP-1細

5、胞內ROS水平的變化；用GriessReagent檢測THP-1細胞培養(yǎng)上清液中NO水平。
　　 CSO-SA(0、2、10、20μg/ml)處理細胞24h后，用黃嘌呤氧化酶法測定細胞內和上清液中SOD活力，通過過氧化氫的消耗速度來測定CAT活力，通過還原型谷胱甘肽(GSH)的消耗量來測定GSH-PX的活力。
　　 3.炎癥因子檢測
　　 用酶聯免疫試劑盒(ELISA)檢測CSO-SA(0、2、10、20μg/m

6、l)處理24h后THP-1細胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子TNF-α、IL-1β的變化。
　　 4.NAC預處理后的變化
　　 NAC500μM預處理THP-1細胞1h后，1)檢測CSO-SA(0、2μg/ml)處理24h后THP-1細胞中ROS水平，2)檢測CSO-SA(0、2μg/ml)處理24h后THP-1細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β的水平；并檢測未用NAC預處理的上述劑量組中各指標的水平，進行比較。
　　

7、 5.所有結果采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析
　　 結果：
　　 1.細胞毒性
　　 對照組細胞生長狀態(tài)良好，細胞多呈圓形或卵圓形，單個、飽滿，懸浮生長，大小均一，10-800μg/ml染毒組出現不同程度的細胞形態(tài)改變，從50μg/ml染毒組起，死亡破碎的細胞明顯增多。透射電鏡顯示20μg/mlCSO-SA使細胞表面細長突起增多，胞內空泡形成。
　　 0-200μg/mlCSO-SA作用下，THP-1細胞

8、存活率顯著下降，存在劑量-效應關系；20μg/ml的CSO-SA作用下，隨著時間的推移，THP-1細胞存活率下降，存在時間-效應關系。
　　 2.氧化還原狀態(tài)
　　 細胞內ROS水平在2μg/ml組顯著升高，其它劑量組與對照組相比P>0.05；SOD、CAT、GSH-PX活性均有波動，但是趨勢不一致。
　　 3.炎癥因子檢測結果
　　 細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-α和IL-1β的濃度在各劑量組均顯著升高，且

9、TNF-α在0-10μg/ml的濃度范圍內存在良好的劑量-效應關系。IL-1β在0-20μg/ml的濃度范圍內存在良好的劑量-效應關系。
　　 4.NAC預處理后結果
　　 經500μM的NAC預處理1h后，0和20μg/mlCSO-SA處理的細胞與未經NAC預處理的細胞相比：1)細胞中ROS水平顯著降低，2)細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-1β的濃度均顯著降低。
　　 結論：
　　 CSO-SA納米顆