草魚不同群體（雌核發(fā)育、ENU誘變）的微衛(wèi)星遺傳結(jié)構(gòu)分析及生長差異研究.pdf

1、草魚(Cetpharyngodon idellus)為我國特有的淡水養(yǎng)殖品種，在養(yǎng)殖魚類中占有重要的經(jīng)濟(jì)地位。由于草魚繁殖周期長，親魚個(gè)體大等原因，給應(yīng)用傳統(tǒng)選育方法育出優(yōu)良品種造成一定的難度，目前草魚尚無國家審定的良種。雌核發(fā)育為快速建立純系的有效途徑，利用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)雌核發(fā)育后代的遺傳多樣性進(jìn)行評(píng)估，在生產(chǎn)性能優(yōu)良的長江水系草魚的基礎(chǔ)上進(jìn)行良種選育可能是一種可行的方法?；诒緦?shí)驗(yàn)室建立6齡ENU誘變草魚群體，挑選4對(duì)優(yōu)良親本建立家系

2、，經(jīng)過生長性狀對(duì)比篩選出具有明顯生長差異的兩個(gè)家系進(jìn)行mstn1、mstn2基因的SNP研究，以期篩選出ENU誘變草魚群體生長改良研究提供候選分子標(biāo)記，進(jìn)一步確定ENU誘變草魚群體分子標(biāo)記輔助育種方案。具體研究如下：
　?。?）以紫外線滅活的團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）精子激活草魚卵子，冷休克抑制第二極體排出的方法誘導(dǎo)出長江水系優(yōu)良F2代草魚減數(shù)雌核發(fā)育子代。在后代中不僅存在雌核發(fā)育后代，還存在草魴雜

3、交后代，雌核發(fā)育后代的體型與草魚一致，而草魴雜交后代的體型介于草魚與團(tuán)頭魴之間。Partec CyFlow倍性分析儀測(cè)定結(jié)果顯示：普通草魚與雌核發(fā)育草魚的相對(duì)DNA含量分別為23.01和22.72，二者的DNA含量接近；而高體型子代的相對(duì)DNA含量為25.38，介于草魚與團(tuán)頭魴（DNA含量28.21）之間，屬于草魴雜交后代。選取17個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)草魚群體、雌核發(fā)育草魚群體和草魴雜交后代的遺傳多樣性進(jìn)行了檢測(cè)，共檢測(cè)出59個(gè)等位基因，其中

4、43.18個(gè)有效等位基因。草魚對(duì)照群體、草魴雜交后代和雌核發(fā)育草魚群體的平均等位基因依次為3.57、2.86和2.79，平均有效等位基因依次為2.93、2.37和1.96，平均期望雜合度在依次為0.6502、0.5573和0.3775，多態(tài)信息含量(PIC)平均值依次為0.5738、0.4649和0.3791。與草魚對(duì)照群體相比，雌核發(fā)育草魚群體的遺傳多樣性顯著下降，表明通過減數(shù)雌核發(fā)育方法可獲得純合性較高的草魚個(gè)體。構(gòu)建了草魚后代不同

5、群體的DNA指紋模式圖，篩選到不同群體的9個(gè)特異微衛(wèi)星標(biāo)記，為草魚優(yōu)良群體的選育奠定基礎(chǔ)。
　?。?）為了獲得雌核發(fā)育ENU誘變草魚群體的相關(guān)遺傳參數(shù)，實(shí)驗(yàn)采用Partec CyFlow倍性分析儀測(cè)定ENU誘變草魚群體（Q群體）和雌核發(fā)育ENU誘變草魚群體（E群體）相對(duì)DNA含量分別為24.02和23.80，二者的DNA含量接近，均為二倍體。選取28個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)Q群體和 E群體多樣性進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，E群體和Q群體的平均等位

6、基因分別為3.7143、5.1786，平均有效等位基因分別為2.1857、4.0028，平均期望純合度分別為0.5122、0.2814，平均期望雜合度分別為0.4878、0.7186，多態(tài)信息含量(PIC)平均值分別為0.4282、0.6606。從個(gè)體在微衛(wèi)星位點(diǎn)的純合率分析，在E群體中，每個(gè)個(gè)體的純合度均小于1.00，說明沒有完全純合的個(gè)體。從每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)在群體的純合率分析，除了微衛(wèi)星位點(diǎn)5476，HLJC118和HLJC81外，其

7、他位點(diǎn)的純合度以不同的速率得到明顯的提高。研究結(jié)果表明經(jīng)過減數(shù)雌核發(fā)育方法，ENU誘變草魚群體的各微衛(wèi)星位點(diǎn)的純合度以不同的速率得到提升，遺傳多樣性明顯降低，此方法可以獲得純合度較高的雌核發(fā)育ENU誘變草魚個(gè)體，為ENU誘變草魚良種選育提供重要遺傳數(shù)據(jù)資料。
　　（3）對(duì)4個(gè)ENU誘變草魚家系進(jìn)行生長對(duì)比，經(jīng)過175天養(yǎng)殖，從4個(gè)家系的生長對(duì)比發(fā)現(xiàn)，從體重增長量的角度看，家系1和家系4相對(duì)于其他2個(gè)家系有明顯的優(yōu)勢(shì)，從體重增重率來

8、看，家系4和家系2相對(duì)于其他2個(gè)家系存在明顯優(yōu)勢(shì)，綜合來看家系4的優(yōu)勢(shì)最明顯，家系3明顯弱于其他3個(gè)家系。家系4的8個(gè)性狀明顯大于其他3個(gè)家系；家系1的體高、頭長略大于家系2，其他的6個(gè)性狀明顯大于家系2和家系3；家系2的8個(gè)性狀明顯大于家系3。采用偏相關(guān)分析各個(gè)形態(tài)性狀與體重的相關(guān)程度得出：家系1中有全長、體長、尾柄長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為0.357、0.619、0.608、0.396；家系2中有全長、體長、頭長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為

9、0.348、0.360、0.687、-0.384；家系3中有全長、體長、尾柄長、尾柄高，相關(guān)系數(shù)依次為0.529、0.449、-0.351、0.384；家系4中有全長、體長、體厚，相關(guān)系數(shù)依次為0.629、0.543、0.590，經(jīng)過因子分析可以明顯區(qū)分家系4與其他3個(gè)家系，以上統(tǒng)計(jì)方法可總結(jié)出家系4和家系3具有明顯的生長差異，運(yùn)用雙向測(cè)序法對(duì)MSTN1、MSTN2基因在家系3、4中進(jìn)行SNP位點(diǎn)篩選，對(duì)于MSTN1，家系3在465 n