多沙唑嗪對硫酸吲哚酚誘導的單核細胞趨化蛋白-1表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　 慢性腎臟疾病(CKD)患者同時也是動脈粥樣硬化性心血管疾病(CVD)的高危人群。大量研究證實:慢性腎臟疾病患者體內蓄積的腎毒性物質可誘導氧化應激反應,促進動脈血管產生粥樣硬化病變。本研究以人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)為對象,探討a1腎上腺素受體阻滯劑--多沙唑嗪(DOX)是否影響腎毒性物質--硫酸吲哚酚(IS)誘導的血管內皮細胞中單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達并初步探討其作用機制。
　　 方法:

2、
　　 培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞,將其分成空白對照組、硫酸吲哚酚組、硫酸吲哚酚與多沙唑嗪聯合組(簡稱聯合組)和多沙唑嗪組。采用DHE染色法觀察細胞內活性氧自由基(ROS)產物的變化；應用Western-Blotting實驗檢測細胞的磷酸化ERK1/2、磷酸化p38MAPK和NF-rκBp65蛋白表達；采用酶聯免疫吸附測定(ELISA)法檢測細胞的培養(yǎng)上清中MCP-1蛋白分泌情況；應用RT-PCR分別測定MCP-1的mRNA和a1腎上

3、腺素受體D、B、A的mRNA的表達。
　　 結果:
　　 (1)硫酸吲哚酚組活性氧自由基產物比對照組明顯增加,聯合組和多沙唑嗪組的活性氧自由基產物比硫酸吲哚酚組明顯減少。硫酸吲哚酚呈時間依賴性誘導人臍靜脈內皮細胞中活性氧自由基產物增加,而多沙唑嗪顯著抑制硫酸吲哚酚誘導的人臍靜脈內皮細胞內活性氧自由基的產生。
　　 (2)硫酸吲哚酚呈時間依賴性誘導HUVEC中ERK1/2MAPK的磷酸化。聯合組細胞在硫酸吲哚酚誘導

4、2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘后測得的磷酸化ERK1/2MAPK的量與硫酸吲哚酚組比較分別減少10.53％、59.44％、42.13％、31.49％、25.67％、19.75％、18.08％(P<0.05)；其中以5分鐘時變化最顯著。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組相比,ERK1/2MAPK蛋白定量差值具有統計學意義(P<0.05)。
　　 (3)聯合組和多

5、沙唑嗪組磷酸化p38MAPK的表達與硫酸吲哚酚組比較無明顯改變。
　　 (4)硫酸吲哚酚組的NF-κBp65較對照組增加94.84％(P<0.05),而聯合組的NF-κBp65比硫酸吲哚酚組減少20.68％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組比較,NF-κBp65蛋白定量差值具有統計學意義(P<0.05)。
　　 (5)硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達與對照組相比呈時

6、間依賴性顯著增加,在硫酸吲哚酚誘導1小時后硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達比對照組增加56.17％(P<0.05),而與硫酸吲哚酚組相比,聯合組MCP-1的mRNA表達減少30.37％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組間差值具有統計學意義(P<0.05)。
　　 (6)與硫酸吲哚酚組相比較,聯合組的MCP-1蛋白濃度在1小時、3小時、6小時、16小時、24小時、48小時分別

7、下降21.07％、41.11％、49.62％、56.02％、38.44％、17.29％,其中以16小時時下降最顯著,兩組間的差值具有統計學意義(P<0.05)。
　　 (7)在mRNA水平證實人臍靜脈內皮細胞內存在a1腎上腺素受體D和A,未發(fā)現a1腎上腺素受體B。
　　 結論:
　　 (1)多沙唑嗪抑制人臍靜脈內皮細胞內NADPH氧化酶來源的ROS產物生成,進而通過抑制ERK1/2MAPK及NF-κBp65途徑的