mTOR信號促進泡沫細胞的形成和抑制泡沫細胞消退的機制研究.pdf

1、目的：
　　動脈粥樣硬化是一種慢性免疫炎癥性疾病伴隨血脂異常。我們之前的研究提示SIRT1能通過LXR/NF-κB信號通路防治動脈粥樣硬化。最近很多的研究集中在mTOR信號與心血管疾病的關系上。本研究旨在探究mTOR信號與SIRT1-LXR-CCR7/NF-κB信號在動脈粥樣硬化的關系。
　　方法：
　　U937細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI1640中，佛波酯作用24h誘導成巨噬細胞后，隨機分成5組：對照組，高脂

2、組，高脂+高膽固醇組，高脂+高膽固醇+LPA組，高脂+高膽固醇+LPA+Rapa組。油紅O染色觀察細胞中脂質的積累情況；MTT法測細胞活力；實時定量PCR法與Western blot法分別檢測mTOR，pS6K，SIRT1，LXRα，CCR7，NF-κB，TNF-α的表達；免疫熒光法檢測NF-κB的核轉位現象。
　　結果：
　　1.為了誘導泡沫細胞形成，U937細胞與佛波酯共培養(yǎng)24小時分化為巨噬細胞，隨后在高脂高膽固醇的環(huán)

3、境中再培養(yǎng)24小時，形成泡沫細胞。油紅O染色提示泡沫細胞中積累了大量的脂滴。同時，Western blot結果提示p-mTOR及其下游p-pS6K的蛋白表達增加。
　　2.油紅O染色結果提示，在高脂高膽固醇+溶血磷脂酸（LPA）模擬致動脈粥樣硬化的環(huán)境下，細胞中的脂滴進一步積累；實時定量PCR和Western blot結果表明，SIRT1,LXRαand CCR7的表達下調，而NF-κB及其下游因子TNF-α的表達上調。
　

4、　3.在泡沫細胞形成和抑制其移出的過程中，作為mTOR抑制劑中的一種，雷帕霉素在100nM的濃度下作用12小時顯著抑制mTOR和pS6K的表達活性。同時觀察到SIRT1，LXRα，CCR7的表達上調，相反，NF-κB和TNF-α的表達下調。
　　4.免疫熒光分析提示，泡沫細胞胞核內的NF-κB蛋白表達多于核外，提示泡沫細胞形成中NF-κB被激活，然而，在100nM Rapa作用下胞核內NF-κB蛋白表達減少，提示NF-κB表達被抑