IRTKS在肝癌中的作用研究.pdf

1、目的:本實驗室前期通過大規(guī)?；蛐酒Y選，發(fā)現(xiàn)IRTKS在肝癌中表達上調。本課題主要研究IRTKS基因的生物學功能以及與肝癌發(fā)生發(fā)展的關系。
　　方法:構建IRTKS基因的真核和原核表達載體，采用熒光定量PCR技術分析IRTKS基因在肝癌等腫瘤組織中的表達水平;觀察IRTKS的過表達以及Knock-down對肝癌細胞的生長、克隆形成能力以及低糖環(huán)境下克隆形成能力的影響;采用免疫熒光、細胞劃痕、transwell技術觀察IRTKS對

2、肝癌細胞遷移能力的影響;通過免疫共沉淀、亞細胞共定位以及GSTpull-down技術分析鑒定IRTKS的相互作用蛋白ASPP2;利用免疫熒光、免疫共沉淀、免疫印跡技術研究IRTKS對胰島素刺激的反應性及其信號通路的影響。
　　結果:熒光定量PCR的結果顯示IRTKS基因在33.8％的肝癌樣本中表達上調2倍以上。IRTKS的表達下調可以抑制Hep3B和YY-8103等肝癌細胞的生長及克隆形成，抑制YY-8103和MHCC-H細胞的軟

3、瓊脂克隆形成，抑制YY-8103細胞的體外遷移能力，對于Hep3B和YY-8103細胞在低糖環(huán)境下的克隆形成生長具有保護作用另一方面，IRTKS的過表達可以促進SK-hep-1和WRL-68等肝癌細胞的生長、克隆形成、軟瓊脂克隆形成及體外遷移能力，對于在低糖環(huán)境下的克隆形成生長也具有保護作用;通過體內(nèi)、體外實驗證實IRTKS與凋亡刺激因子ASPP2具有相互作用;在胰島素的刺激下，IRTKS的磷酸化水平出現(xiàn)升高并呈現(xiàn)時間相關性;IRTKS