下調RI通過調節(jié)EMT和ILK信號通路增強膀胱癌T24細胞轉移的機制研究.pdf

1、目的:探討下調RI通過調節(jié)EMT的發(fā)生和ILK信號通路對膀胱癌T24細胞轉移的影響。
　　 方法:用pGensil-1-siRNA-RI等相關質粒轉染膀胱癌T24細胞，并用G418篩選出陽性克隆，RT-PCR檢測各組細胞中RI mRNA的表達水平、細胞免疫熒光和Western blot檢測RI和EMT相關蛋白的表達水平;檢測細胞形態(tài)及細胞骨架的變化;檢測細胞遷移、粘附和侵襲能力的變化;通過MTT檢測細胞生長情況的變化;用細胞免疫

2、化學標檢ILK與RI的關系及ILK信號通路P-AKT及P-GSK3β的表達水平;最后，將五組細胞分別注入BALB/c裸鼠皮下(SCXK京2009/0004)構建體外模型，35天后取瘤并測重;免疫組織化學檢測瘤組織中RI、E-cadherin、Vimentin、Twist、Snail、Slug、ILK、MMP2、MMP9 andN-cadherin蛋白的表達;冰凍切片檢測瘤組織血管及P-AKT及P-GSK3β的表達水平;取得正常及病理狀態(tài)

3、下的人組織，用HE染色及免疫組織化學再次檢測RI及相關蛋白的表達情況。
　　 結果:我們證實，通過誘導膀胱癌T24細胞的EMT的發(fā)生和ILK的下游信號通路，下調RI后，細胞的增殖、轉移和侵襲能力增加，細胞的形態(tài)和黏附能力發(fā)生了改變，細胞骨架也獲得了重排。我們發(fā)現(xiàn)，在臨床膀胱癌病人組織標本中，高轉移能力的組織Vimentin，Snail，Sluga和Twist的表達更高，而E-cadherin和RI的表達下降。最后，我們發(fā)現(xiàn)，下調