PIM-2在HepG2細胞和L-O2細胞中的表達.pdf

1、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個多因素、多步驟和多基因參與的過程。抑癌基因的失活和/或癌基因的激活是其中最基本的分子事件。而抑癌基因或癌基因主要通過誘導或阻止細胞凋亡來防止或促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在癌基因中，Pim家族的作用引起越來越多的關注。其中，對Pim-2信號通路的研究目前國內外才剛剛開始展開，初步的結論該通路有著非常強大的抗凋亡作用，在促進腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用不可低估，并且同已知的其他凋亡抑制蛋白，如c-Myc、Bcl家族、Akt等蛋白相比

2、，Pim-2抑制凋亡的機制是截然不同的。 最近，在實體腫瘤前列腺癌中發(fā)現(xiàn)了該途徑的存在。如果證實了該途徑在肝細胞肝癌中的作用，并進一步明確其信號通路組成和調控凋亡的作用機理，將為肝細胞肝癌提供新的基因治療靶點，具有較大的研究價值和應用前景。在本部分實驗中，我們利用HepG2細胞為肝細胞肝癌細胞株的典型代表，L-02作為正常肝細胞的代表，研究PIM-2在itepG2細胞和L-02細胞表達的情況。 目的：通過檢測PIM-2m

3、RNA及蛋白在ltepG2細胞和L-02細胞表達的情況，探討PIM-2在原發(fā)性肝細胞肝癌發(fā)生中的作用，為進一步開展PIM-2基因調控肝癌細胞凋亡的信號通路研究提供可行性及初步的實驗依據 方法：以人肝細胞肝癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)細胞株HepG2及正常肝細胞株L-02為研究對象，在完全、高糖DMEM培養(yǎng)基(含10％胎牛血清)中培養(yǎng)細胞，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)，對數生長期行HE染色；RT-PCR分別

4、檢測HepG2細胞及L-02細胞中PIM-2的mRNA表達，DocGel2000凝膠圖像分析系統(tǒng)成像，并以Bio-ImageAnalysisSystem進行分析；用SABC法免疫細胞化學檢測HepG2細胞及L-02細胞中PIM-2蛋白表達，應用北航CM-2000B型生物醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)對免疫細胞化學圖片染色圖像進行體視學分析，得出平均光密度。實驗所得數據以均數士標準差((x)±s)表示；數據分析采用SPSS10．0軟件，t檢驗，P

5、01表示有統(tǒng)計學意義 結果：(1)形態(tài)學觀測：HepG2細胞及L-02細胞在對數生長期生長狀況良好，透明度大，折光性強，輪廓不清，并可見許多分裂期細胞；(2)細胞爬片免疫細胞化學示L-02細胞Pim-2蛋白表達非常微弱，幾乎難以顯現(xiàn)，而HepG2細胞Pim-2蛋白呈強陽性表達，其陽性產物呈棕黃色，主要分布于胞漿和胞核。圖像分析示免疫細胞化學細胞爬片平均光密度L-02細胞：O．108+0．016；HepG2細胞：0．438+0．0

6、11：兩者的平均光密度經統(tǒng)計學分析有顯著性差異(P<0．01)；(3)正常肝細胞株L-02PIM-2／p．actin相對光密度均值：O．181+0．025；人肝癌細胞株HepG2PIM-2／p—actin相對光密度均值：0．754+0．035。L-02PIM-2mRNA的表達水平較HepG2低(P