油菜近等基因系鑒定及BnWRKY16、BnWRKY52功能初探.pdf

1、油菜是中國主要種植的油料作物，對我國國民經濟的發(fā)展有著重要的作用，提高油菜的油分含量一直是油菜育種研究的首要任務。WRKY轉錄因子作為一種調控因子在植物調控網絡中占據著重要地位，參與植物的生長發(fā)育、抗逆、抗病等一系列的調控過程。我們通過轉錄組測序和分析得到了兩個與含油量有關的WRKY轉錄因子BnWRKY52、BnWRKY16。本實驗利用高代自交姐妹系構建了兩個高含油量和中低含油量的近等基因系，并以這兩個近等基因系材料為基礎材料，初步研究

2、了BnWRKY52、BnWRKY16在油菜種子成熟與萌發(fā)過程中的表達情況。具體情況如下：
　　1.以NJ9高油品系為基礎材料，利用連續(xù)自交的方法構建含油量差異的擬近等基因系。以來源于蕓薹屬Brassica DB公共數據庫的156對SSR引物對9個擬近等基因系株系材料進行擴增，篩選出32對條帶清晰、重復性好的引物用于近等性分析。基于32對SSR引物PCR擴增結果，經過遺傳相似性系數估算以及聚類分析鑒定近等基因系的近等性，結果顯示9個

3、候選株系材料遺傳相似性系數均在0.85到0.94之間，其中YC13-554和YC13-559的遺傳相似性系數最大為0.94，確定為近等基因系。而后對這兩個材料成熟期的農藝性狀進行調查，結果進一步確定了YC13-554和YC13-559為高（中低）含油量近等基因系。
　　2.以含油量差異的近等基因系材料YC13-554和YC13-559為基礎材料，利用實時定量PCR的方法，檢測轉錄因子BnWRKY52、BnWRKY16在種子成熟過程

4、中的基因表達量。結果顯示，在種子成熟的不同時期BnWRKY52在油菜YC13-554和YC13-559中的表達均呈現上升趨勢，且在油菜YC13-559中表達量比在YC13-554中高；WRK Y16在油菜YC13-554和YC13-559的表達均只出現一個較大的表達峰，在油菜YC13-559中的表達峰出現早于油菜YC13-554中。據以上結果表明，轉錄因子WKY52和WRKY16與油菜油分合成的調控有關。為驗證所得結果，選擇了三個已確定

5、的與油菜含油量有關的關鍵酶的基因二?；视王；D移酶(DTAG)、乙酰輔酶A羧化酶、Wri1，檢測其表達量，并使BnWRKY52、BnWRKY16表達量與之進行對比。結果顯示，兩者之間表達模式相似。
　　3.以近等基因系材料YC13-554和YC13-559為基礎材料，利用實時定量PCR技術檢測轉錄因子BnWRKY52、BnWRKY16在油菜種子萌發(fā)過程中的基因表達量。結果顯示，在種子萌發(fā)的不同時期，BnWRKY52、BnWRKY