胃癌組織中MGMT、RASSF1A基因啟動子區(qū)甲基化研究.pdf

1、目的:本研究在檢測胃癌及癌旁正常組織的基礎上，探討MGMT（6-氧-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶）以及RASSF1A（RAS相關區(qū)域家族1A）基因啟動子區(qū)甲基化的狀況，分析胃癌及癌旁正常組織中兩組基因的甲基化改變情況，主要分析在胃癌產(chǎn)生、進展中MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化狀況的作用。胃癌是一類普遍的消化道惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)死亡率在全部惡性腫瘤中占據(jù)第二位。多階段變異、多基因累積產(chǎn)生的異常狀態(tài)是類似胃癌和其他惡性腫瘤的發(fā)生

2、基礎。細胞周期調節(jié)基因、DNA錯配修復基因和腫瘤抑制基因等是胃癌中產(chǎn)生多種因DNA甲基化而失活的基因。
　　方法:
　　(1)收集青島市市立醫(yī)院2012年至2013年手術切除的，經(jīng)病理檢查證實的胃癌標本60例，癌旁正常組織取自相應距腫瘤邊緣5cm以上的黏膜60例。分別提取DNA，將提取的DNA進行亞硫酸鈉修飾，將最后修飾的DNA進行PCR擴增。通過甲基特異性聚合酶擴增鏈式反應(methylation specific PCR

3、，MSP)檢測胃癌組織及相應癌旁正常組織MGMT、RASSF1A基因啟動子的甲基化狀況。綜合分析兩個基因的甲基化與胃癌發(fā)生的關系。
　　(2)分別提取60例胃癌組織與癌旁正常組織的RNA，逆轉錄合成cDNA，繼而進行PCR擴增，用實時熒光定量逆轉錄-多聚合酶鏈反應(real-time RT-PCR)檢測基因MGMT、RASSF1A的mRNA表達情況。
　　(3)取胃癌組織、癌旁正常組織，用免疫組織化學方法分析MGMT及RAS

4、SF1A基因的表達情況，同時探討它們與胃癌發(fā)生的關系。實驗采用統(tǒng)計學軟件包SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料的比較采用x2檢驗，組間應用t檢驗進行分析;以P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　(1)通過甲基特異性聚合酶擴增鏈式反應(methylation specific PCR, MSP)檢測胃癌組織MGMT啟動子區(qū)甲基化率為45.00％(27/60)明顯高于正常組織8.33％(5/60)，胃癌組織RA

5、SSF1A啟動子區(qū)甲基化率為64.70％(37/60)明顯高于正常組織6.67％(4/60)，胃癌組織中MGMT、RASSF1A基因的甲基化陽性率較正常組織明顯升高(P＜0.05)。
　　(2)通過實時熒光定量逆轉錄-多聚合酶鏈反應檢測胃癌組織中MGMTmRNA表達陽性率為38.3％(23/60)明顯低于正常組織96.67％(58/60)，胃癌組織中RASSF1AmRNA表達陽性率為20.00％(12/60)明顯低于正常組織100

6、％(60/60)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(3)通過免疫組織化學SP法檢測MGMT蛋白表達在胃癌組織的31.61％(19/60)明顯低于癌旁正常組織中的陽性率為90.00％(54/60)，RASSF1A在胃癌組織的30.00％(18/60)明顯低于癌旁正常組織中的陽性率為91.67％(55/60)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　(1)用甲基特異性聚合酶擴增鏈式反應、實時熒光定量逆轉