成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體阻滯劑對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 FGFR抑制劑通過(guò)MAPK信號(hào)通路對(duì)T24細(xì)胞增殖和遷移的影響
　　目的:我國(guó)最常見(jiàn)的泌尿系統(tǒng)腫瘤是膀胱癌，在全部惡性腫瘤中約占3.2％，膀胱癌以尿路上皮細(xì)胞腫瘤為主，約占95％。膀胱癌會(huì)直接威脅患者生存。目前對(duì)于膀胱癌的藥物治療有很多，但是仍有一些不足。FGFR在膀胱上皮細(xì)胞中廣泛存在，有研究表明其可能參與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此本研究旨在觀察抑制FGFR是否可以有效抑制T24細(xì)胞的增殖和遷移，及其可能的信號(hào)通路。

2、　　方法:分別用不同濃度0、60、70、80μmol/LFGF受體抑制劑(sprouty)處理體外培養(yǎng)的膀胱癌T24細(xì)胞后，首先觀察細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)變化;遷移觀察sprouty對(duì)膀胱癌細(xì)胞遷移能力的影響情況;膀胱癌T24細(xì)胞增殖的變化通過(guò)MTT比色法檢測(cè);通過(guò)Western blot檢測(cè)sprouty作用后膀胱癌T24細(xì)胞ERK, P38，JNK磷酸化水平以及總蛋白表達(dá)情況;統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:本研究采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3、用采用t檢驗(yàn)對(duì)計(jì)量資料，x2檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以p＜0.05為差異有顯著意義。
　　結(jié)果:FGFR抑制劑（Sprouty）能明顯抑制T24細(xì)胞增殖，細(xì)胞發(fā)生明顯的皺縮，凋亡。MTT結(jié)果顯示FGFR抑制劑處理膀胱癌細(xì)胞，細(xì)胞增殖具有劑量和時(shí)間依賴性，即隨藥物濃度升高(0-80μmol/L)和作用時(shí)間的延長(zhǎng)(24-72h)而抑制作用增強(qiáng)。遷移觀察sprouty對(duì)膀胱癌細(xì)胞遷移能力的影響，結(jié)果顯示sprouty0、60、70

4、、80μmol可以明顯抑制細(xì)胞的遷移，并且隨著作用濃度的增加而增加。進(jìn)一步檢查sprouty作用可能的信號(hào)通路，westernblot的結(jié)果顯示，sprouty可以明顯抑制ERK磷酸化水平，增加JNK磷酸化水平，而對(duì)于P38并無(wú)明顯影響。
　　結(jié)論:FGFR抑制劑可能通過(guò)MAPK信號(hào)通路抑制T24細(xì)胞增殖和遷移。
　　第二部分 FGFR抑制劑對(duì)于膀胱腫瘤生長(zhǎng)以及侵襲的影響
　　目的:腫瘤的形成是異型細(xì)胞過(guò)度增殖，轉(zhuǎn)移。

5、腫瘤細(xì)胞首先發(fā)生局部浸潤(rùn)，進(jìn)而轉(zhuǎn)移到其他組織，增加其侵襲性以及惡性程度，最終導(dǎo)致患者死亡。腫瘤細(xì)胞的局部浸潤(rùn)首先是腫瘤細(xì)胞之間的連接減弱，粘附力降低，腫瘤細(xì)胞與基底膜粘附降低，細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生降解，由此腫瘤細(xì)胞通過(guò)降解空隙發(fā)生遷移。在第一部分已經(jīng)證實(shí)了FGFR可以通過(guò)MAPK信號(hào)通路抑制T24細(xì)胞的增殖和遷移，在本節(jié)內(nèi)容中進(jìn)一步探討FGFR抑制劑是否可以對(duì)于膀胱癌腫瘤生長(zhǎng)以及侵襲產(chǎn)生相應(yīng)的作用。
　　方法:選取BALB/C nu/n

6、u裸鼠，共40只，4～6周齡，體重20g左右，恒溫恒濕飼養(yǎng)，自由進(jìn)食水。裸鼠在動(dòng)物房適應(yīng)3天后，即進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的局部注射。準(zhǔn)備腫瘤細(xì)胞:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的T-24細(xì)胞，調(diào)整活細(xì)胞濃度為5×106/ml，于每只裸鼠腹股溝皮下接種上述單細(xì)胞懸液0.2ml后，將裸鼠隨機(jī)分為四組，每組10只，分別為對(duì)照組、bFGF組，sprouty組以及sprouty+bFGF共同作用組。并在第二天開(kāi)始給藥，腹腔注射1次/d，對(duì)照組注射等量生理鹽水。培養(yǎng)T24細(xì)胞

7、分別給予，與上述分組相同，給藥12h后，觀察MMPs的變化，并提取在體腫瘤細(xì)胞RNA，進(jìn)一步觀察MMPs mRNA水平的改變。
　　結(jié)果:bFGF具有明顯的成瘤性，而FGFR抑制劑sprouty可以抑制腫瘤的生成，并且可以逆轉(zhuǎn)bFGF對(duì)腫瘤生成的促進(jìn)作用。bFGF可能通過(guò)調(diào)節(jié)MMPs的表達(dá)從而影響腫瘤細(xì)胞的侵襲，F(xiàn)GFR抑制劑sprotuy能抑制MMPs的表達(dá)，并且可以阻斷bFGF對(duì)MMPs表達(dá)的調(diào)控作用。
　　結(jié)論:FGF