茶樹miRNA靶基因的鑒定及在低溫脅迫下的表達分析.pdf

1、分類號：單位代碼：10364密級：學號：13720271安徽農業(yè)大學安徽農業(yè)大學學位論文茶樹miRNA靶基因的鑒定及在低溫脅迫下的表達分析IdentificationofmiRNAtargetgenesintea(Camelliasinensis)theirexpressionpatternsundercoldstress研究生：謝小芳指導教師：李葉云副教授合作指導教師：申請學位門類級別：農學碩士專業(yè)名稱：茶學研究方向：茶樹生物技術與種

2、質資源所在學院：茶與食品科技學院答辯委員會主席：二零一六年五月I摘要低溫是茶樹常見的一種非生物脅迫，嚴重影響茶園的優(yōu)質高產栽培。micNAs(miRNAs)是一種小分子非編碼RNA，通過對靶基因的轉錄后調控參與植物生長發(fā)育及抗逆境的調節(jié)。從miRNA靶基因的角度研究茶樹抗寒分子機制，對培育抗寒茶樹品種具有重要作用。本研究利用降解組測序技術鑒定了茶樹miRNA的靶基因，其中有8個靶基因通過RLM5’RACE實驗得到了驗證。用實時熒光定量法

3、（qRTPCR）分析了一部分低溫差異miRNAs的表達。結合低溫脅迫差異表達miRNAs及降解組測序結果，對部分低溫差異miRNAs及其靶基因進行了表達模式分析。獲得的主要結果如下：（1）構建了4℃低溫處理組和對照組兩個降解組測序文庫。降解組測序共發(fā)現(xiàn)了36個已知miRNA基因家族的316個靶基因和113個新miRNAs的246個靶基因。GO分析顯示它們參與了廣泛的細胞反應和代謝過程。利用RLM5’RACE方法，驗證了7個miRNAs對

4、8個靶基因的剪切位點，結果顯示與降解組測序結果一致，表明降解組測序結果具有很高的準確性。（2）基于課題組前期獲得的小RNA高通量測序及微列陣芯片的結果，篩選出27個低溫脅迫差異表達miRNAs，其中，有9個是新miRNAs。通過qRTPCR分析了6個miRNAs在低溫脅迫下的表達模式，qRTPCR結果與芯片結果基本一致。結合降解組測序結果發(fā)現(xiàn)，13個miRNAs對應85個靶基因，這些靶基因大部分為轉錄因子，還包括酶和功能蛋白。其余14個

5、miRNAs在降解組中沒有找到對應的靶基因。（3）qRTPCR研究了5對低溫差異表達miRNAs及其靶基因（miR156SPL、miR164NAC1、miR165REV、miR396GRF、miR6149APX）在4℃低溫脅迫下的表達模式。結果顯示這些miRNAs在低溫下均下調表達，而其靶基因均上調表達。此外，qRTPCR研究了miR164家族的2個成員和它們的靶基因NAC1在不同抗寒茶樹品種(龍井43、英紅9號)中的表達。vvimiR